多肽YDERQH的参数和合成路线

多肽YDERQH的参数和合成路线

一、Tyr-Asp-Glu-Arg-Gln-His的结构图如下

二、Tyr-Asp-Glu-Arg-Gln-His的多肽参数如下

单字母：H2N-YDERQH-OH

三字母：H2N-Tyr-Asp-Glu-Arg-Gln-His-COOH

中文序列：酪氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-精氨酸-谷氨酰胺-组氨酸

氨基酸个数：6

分子式：C35H50N12O13

平均分子量：846.84

精确分子量(Exact Mass)：846.36

等电点(PI)：7.55

pH=7.0时的净电荷数：0.21

GRAVY值：-3.18

亲水残基比例：0.13

消光系数：1490

平均亲水性及多肽溶解建议：亲水（该多肽在纯水中溶解性较好，大多数情况下无需助溶）

三、H2N-YDERQH-OH的静电荷图

四、多肽Tyr-Asp-Glu-Arg-Gln-His的亲疏水比例统计（条形图）

五、多肽Tyr-Asp-Glu-Arg-Gln-His的亲疏水性氨基酸、极性非极性氨基酸、酸碱性氨基酸的统计（扇形图）

六、多肽Tyr-Asp-Glu-Arg-Gln-His的合成步骤：

1、合成CTC树脂：称取0.3g CTC Resin（如初始取代度约为1.0mmol/g）和0.4 mmol的Fmoc-His(Trt)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入树脂0.9 mmol的DIPEA((Mw：129.1,d：0.740g/ml))，反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应)。得到Fmoc-His(Trt)-CTC Resin备用。结构图如下：

2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到H2N-His(Trt)-CTC Resin。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色）。结构图如下：

3、缩合：取2.7mmol Fmoc-Gln(Trt)-OH 氨基酸,加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再分别加入1.8mmol DIPEA,1.67mmol HBTU。反应30分钟后，用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin

H2N-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin

H2N-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin

H2N-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin

最后再经过步骤二得到 H2N-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-His(Trt)-CTC Resin，结构如如下：

5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品 Ala-Cys-Asp-Glu-Arg。

切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）

6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。