PIM1基因通过调控STAT3信号通路蛋白表达对食管癌细胞生物学行为的影响

2024年2月3日发(作者：)

·３９２·徐汉桥，等　　ＰＩＭ１基因通过调控ＳＴＡＴ３信号通路蛋白表达对食管癌细胞生物学行为的影响ＰＩＭ１基因通过调控ＳＴＡＴ３信号通路蛋白表达对食管癌细胞生物学行为的影响徐汉桥，潘　捷，田学涛，陈志强ＥｆｆｅｃｔｏｆＰＩＭ１ｇｅｎｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＸＵＨａｎｑｉａｏ，ＰＡＮＪｉｅ，ＴＩＡＮＸｕｅｔａｏ，ＣＨＥＮＺｈｉｑｉａｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＷｕｈａｎＮｏ．６Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＪｉａｎｇｈａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＨｕｂｅｉＷｕｈａｎ４３００１５，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｐｒｏｔｏ－ｏｎｃｏｇｅｎｅＰＩＭ１ｇｅｎｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒ３（ＳＴＡＴ３）ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＰＩＭ１ｓｉＲＮＡａｎｄｓｉＲＮＡＣｏｎｔｒｏｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｎａｍｅｄＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡｇｒｏｕｐａｎｄＮＣｇｒｏｕｐ，ａｎｄａｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｅｔ．Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＩＭ１ｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ，ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎｄＴｒａｎｓｗｅｌｌａｓｓａｙ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ａｎｄＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＩＭ１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｏｆＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅＯＤｖａｌｕｅ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｎｕｍｂｅｒｏｆＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｉｎＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＰＣＮＡ，ＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｐ－ＳＴＡＴ３ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅＮＣｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＰＩＭ１ｒｅｇｕｌａｔｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ＰＩＭ１ｇｅｎｅ，ＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｉｎｖａｓｉｏｎ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０２１，２９（０３）：０３９２－０３９６【摘要】　目的：探讨原癌基因ＰＩＭ１通过调控信号转导子与激活子３（ＳＴＡＴ３）信号通路对食管癌ＫＹＳＥ１５０细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法：分别以ＰＩＭ１ｓｉＲＮＡ和ｓｉＲＮＡＣｏｎｔｒｏｌ转染ＫＹＳＥ１５０细胞，命名为ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组和ＮＣ组，同时设置空白对照Ｃｏｎｔｒｏｌ组。采用实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）和蛋白免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）法检测各组细胞中ＰＩＭ１表达变化。采用噻唑蓝（ＭＴＴ）法、流式细胞术和Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测与细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移相关蛋白以及与ＳＴＡＴ３信号通路相关蛋白表达水平。结果：ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组ＫＹＳＥ１５０细胞中ＰＩＭ１ｍＲＮＡ和蛋白表达显著低于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５）。ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组ＫＹＳＥ１５０细胞光密度（ＯＤ）值、侵袭和迁移细胞数均显著低于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５），凋亡率明显高于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５），增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）、基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）和ｐ－ＳＴＡＴ３蛋白表达水平均低于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５），剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶３（ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３）蛋白表达水平高于Ｃｏｎｔｒｏｌ组。Ｃｏｎｔｒｏｌ组和ＮＣ组以上各指标相比，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：ＰＩＭ１通过调控ＳＴＡＴ３信号通路调节食管癌ＫＹＳＥ１５０细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移。【关键词】ＰＩＭ１基因；ＳＴＡＴ３信号通路；增殖；凋亡；侵袭；迁移【中图分类号】Ｒ７３５．１　　　【文献标识码】Ａ　　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－４９９２．２０２１．０３．００６【文章编号】１６７２－４９９２－（２０２１）０３－０３９２－０５【收稿日期】　２０１９－０４－０１【修回日期】　２０１９－０５－０５【作者单位】　江汉大学附属医院武汉市六医院胸外科，湖北　武汉　４３００１５【作者简介】　徐汉桥（１９８２－），男，湖北武汉人，主治医师，研究方向：普通胸外科。Ｅ－ｍａｉｌ：１５６２９６７９１１＠ｑｑ．ｃｏｍ

现代肿瘤医学　２０２１年２月　第２９卷第０３期　　ＭＯＤＥＲＮＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ｆｅｂ２０２１，ＶＯＬ２９，Ｎｏ０３　　食管癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，具有较强的侵袭性，其在世界上所有癌症中的发病率和死亡率均位居前列［１］·３９３·１．４　ｑＲＴ－ＰＣＲ检测ＰＩＭ１相对表达分别收集转染４８ｈ后各组ＫＹＳＥ１５０细胞，使用ＴＲＩｚｏｌ试剂在冰上提取ＫＹＳＥ１５０细胞中总ＲＮＡ，ＲＮＡ样品经分光光度计测定纯度和浓度后，使用逆转录试剂盒获得ｃＤＮＡ。以ｃＤＮＡ为模板，采用ＳＹＢＲＰｒｉｍｉｘＩＭ１基因Ⅱ试剂盒进行Ｐ扩增，反应体系：上下游引物各１μＬ，ＳＹＢＲＰｒｉｍｉｘ１０μＬ，ｃＤＮＡ２μＬ，ＤＥＰＣ水６μＬ；反应条件：９４℃３ｍｉｎ，９４℃１０ｓ，５８℃２０ｓ，７２℃１０ｓ，共设置４０个循环，以β－ａｃｔｉｎ为内参，－ＣｔΔΔ使用２法计算各组ＫＹＳＥ１５０细胞中ＰＩＭ１ｍＲＮＡ相对表。流行病学报告显示，食管癌发病率最高的是伊朗，其［２］次是中国、南非和法国等其他地区。尽管食管癌患者的预后在过去十年中有所改善，但患者往往在术后第１年内复３］发，５年生存率只有３０％［。食管癌术后复发、侵袭和转移受原癌基因激活，抑癌基因失活和蛋白表达异常等相关因素的影响。原癌基因ＰＩＭ１属于丝氨酸／苏氨酸激酶ＰＩＭ激酶家族成员，最初是从小鼠淋巴瘤样本中鉴定出来的作为一种４］频繁激活的基因，其在进化上高度保守［。目前研究显示，达水平。１．５　ＭＴＴ实验检测细胞增殖能力各组ＫＹＳＥ１５０细胞以胰酶消化，收集细胞计数后接种ＰＩＭ１在食管癌、前列腺癌、结直肠癌等多种肿瘤中异常表达，其可通过抑制细胞凋亡，促进细胞周期进程和促进基因组不稳定来促进肿瘤发生［５－７］。信号转导子与激活子３（ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ３，ＳＴＡＴ３）信号通路在个体发育、细胞生长及肿瘤发生等生理病理过程中发挥重要作用［８－９］。目前研究发现，ＳＴＡＴ３／ＰＩＭ１信号轴在人肺动脉高压的发病机制中发挥关键作用［１０］。提示ＰＩＭ１在肿瘤中发挥原癌基因的作用可能与调控ＳＴＡＴ３信号通路有关。因此本实验探究ＰＩＭ１基因能否通过调控ＳＴＡＴ３信号通路参与食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的细胞学行为，以期为食管癌的诊断和治疗提供新的分子作用靶点。１　材料与方法１．１　材料人食管癌ＫＹＳＥ１５０细胞（中国科学院上海生命科学学院细胞库）；ＲＰＭＩ－１６４０培养基（美国ＨｙＣｌｏｎｅ公司）；胎牛血清（美国Ｇｉｂｃｏ公司）；胰蛋白酶（北京索莱宝生物科技有限公司）；ＭＴＴ试剂（美国Ｓｉｇｍａ公司）；ＴＲＩｚｏｌ试剂、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂、二甲基亚砜（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；逆转录试剂盒（美国Ｔｈｅｒｍｏ公司）；ＳＹＢＲＰｒｉｍｉｘⅡ荧光试剂、ＡｎｎｅｘｉｎⅤ－ＦＩＴＣ／ＰＩ细胞凋亡检测试剂盒（日本ＴａＫａＲａ公司）；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室、Ｍａｔｒｉｇｅｌ基质胶（美国ＢＤ公司）；ＲＩＰＡ细胞裂解液、ＢＣＡ蛋白浓度检测试剂盒（上海碧云天生物技术研究所）；ＥＣＬ发光试剂（美国Ｐｉｅｒｃｅ公司）；鼠抗人ＰＣＮＡ单体、鼠抗人ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３单体、鼠抗人ＭＭＰ－２单体、鼠抗人ＭＭＰ－９单体、鼠抗人ＳＴＡＴ３单体、鼠抗人ｐ－ＳＴＡＴ３单体及辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠二抗（美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司）。１．２　细胞培养ＫＹＳＥ１５０细胞培养在含１０％灭活胎牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养基的培养瓶中，将细胞培养瓶放置于３７℃恒温培养箱中培养，培养箱条件设置为：湿度１００％，ＣＯ２体积分数为５％，观察细胞生长状态，每２～３ｄ更换１次新鲜培养液，待细胞贴壁生长密度至８０％以上时，使用０．２５％胰蛋白酶消化细胞，进行传代培养，处于对数生长期的细胞用于后续实验。１．３　细胞处理和分组将对数增殖期的ＫＹＳＥ１５０细胞用胰蛋白酶消化，收集细胞并计数，将细胞接种到９６孔板中，待细胞生长汇合率达５０％时进行转染，具体操作步骤参照Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂说明书，将转染ＰＩＭ１ｓｉＲＮＡ的细胞命名为ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组，将转染ｓｉＲＮＡＣｏｎｔｒｏｌ的细胞命名为ＮＣ组，同时空白对照即未转染的细胞命名为Ｃｏｎｔｒｏｌ组，每组设置３个复孔，转染６ｈ后进行换液。到９６孔板中，各组细胞分别在转染２４、４８、７２ｈ时检测细胞增殖能力，简言之，在各个时间点向细胞中加入２０μＬＭＴＴ，３７℃孵育４ｈ，弃上清，再向每孔细胞中加入１５０μＬ二甲基亚砜，避光振荡１０ｍｉｎ，使用酶标仪测定波长为４５０ｎｍ处的光密度（ＯＤ）值，每组细胞每个时间点设置４个复孔，实验重复３次。１．６　流式细胞术检测细胞凋亡率收集转染４８ｈ后各组ＫＹＳＥ１５０细胞，用预冷的ＰＢＳ将细胞洗涤２次，加入１００μＬＢｉｎｄｉｎｇＢｕｆｆｅｒ重悬细胞，再向细胞悬液中加入ＡｎｎｅｘｉｎⅤ－ＦＩＴＣ５μＬ，轻柔混匀，室温孵育１５ｍｉｎ，向细胞中加入ＰＩ染液５μＬ，避光孵育１５ｍｉｎ，添加４００μＬＢｉｎｄｉｎｇＢｕｆｆｅｒ，１ｈ内上流式细胞仪检测细胞凋亡情况。１．７　Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测细胞侵袭和迁移能力收集转染２４ｈ后各组ＫＹＳＥ１５０细胞，使用不含血清的培养液重悬细胞，调整细胞密度为５×１０５个／ｍＬ。取２００μＬ细胞悬液加入到Ｍａｔｒｉｇｅｌ基质胶包被的Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室的上室（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验上室不以Ｍａｔｒｉｇｅｌ基质胶包被），下室加入６００μＬ含１０％胎牛血清的培养液，继续培养２４ｈ。取出小室，弃去旧培养液，以预冷的ＰＢＳ洗涤小室２次，以４％多聚甲醛４℃固定３０ｍｉｎ，再以０．１％结晶紫染色２０ｍｉｎ。ＰＢＳ洗涤３次，用棉签拭去未穿膜的细胞，在显微镜下随机选取５个视野，观察并记录穿膜细胞数，实验重复３次。以穿膜细胞数表示细胞侵袭或迁移能力。１．８　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞中蛋白表达水平收集转染４８ｈ各组ＫＹＳＥ１５０细胞，在细胞中加入适量ＲＩＰＡ细胞裂解液，在冰上提取细胞中总蛋白，行１０％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳，分离蛋白，随后采用湿转法电转至硝酸纤维素膜上，５％脱脂奶粉中室温封阻１．５ｈ。分别加入ＰＩＭ１、ＰＣＮＡ、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、ＳＴＡＴ３、ｐ－ＳＴＡＴ３及ＧＡＰＤＨ一抗（均为１∶８００稀释），４℃过夜杂交，再加入１∶２０００稀释的二抗，室温杂交２ｈ，加入ＥＣＬ化学发光试剂进行显色，于凝胶成像系统中成像拍照，以ＧＡＰＤＨ为内标，采用Ｑｕａｎｔｉｔｙ软件分析各组细胞中蛋白条带灰度值，计算目的蛋白相对表达水平。１．９　统计学分析采用ＳＰＳＳ２１．０软件分析数据，计量资料均以珋ｘ±ｓ表示，采用单因素方差分析比较组间差异，采用ＳＮＫ－ｑ检验分析比较两两组间差异，以Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。２　结果２．１　转染效率检测

·３９４·徐汉桥，等　　ＰＩＭ１基因通过调控ＳＴＡＴ３信号通路蛋白表达对食管癌细胞生物学行为的影响＜０．０５），而Ｃｏｎｔｒｏｌ组和ＮＣ组细胞ＯＤ值比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），在转染２４ｈ时各组细胞ＯＤ值均无明显差异（Ｐ＞０．０５）。珋表２　ＭＴＴ法检测各组ＫＹＳＥ１５０细胞ＯＤ值　ｘ±ｓ珋Ｔａｂ．２　ＭＴＴａｓｓａｙｆｏｒＯＤｖａｌｕｅｓｏｆＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ　ｘ±ｓＧｒｏｕｐＣｏｎｔｒｏｌＮＣＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡＦＰＯＤｖａｌｕｅ（４５０ｎｍ）λ＝２４ｈ０．２８±０．０３０．２６±０．０３０．２５±０．０２０．９５５０．４３７４８ｈ０．４８±０．０５０．４７±０．０５０．３２±０．０３１２．２５４ＰＩＭ１ｓｉＲＮＡ转染食管癌ＫＹＳＥ１５０细胞４８ｈ后，ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中ＰＩＭ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平，结果如图１和表１所示，ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组细胞中ＰＩＭ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平均低于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５）；而ＮＣ组和Ｃｏｎｔｒｏｌ组的ＰＩＭ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平无显著变化（Ｐ＞０．０５）。７２ｈ０．８１±０．０８０．７９±０．０８０．４２±０．０４３０．１４６０．００８０．００１注：与Ｃｏｎｔｒｏｌ组比，０．０５。Ｐ＜图１　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组ＫＹＳＥ１５０细胞中ＰＩＭ１蛋白表达水平Ｆｉｇ．１　ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆＰＩＭ１ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐｏｆＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓ表１　转染ＰＩＭ１ｓｉＲＮＡ对ＫＹＳＥ１５０细胞ＰＩＭ１ｍＲＮＡ和蛋白表达的珋影响　ｘ±ｓＴａｂ．１　ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｆＰＩＭ１ｓｉＲＮＡｏｎＰＩＭ１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ珋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓ　ｘ±ｓＧｒｏｕｐＣｏｎｔｒｏｌＮＣＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡＦＰＰＩＭ１ｍＲＮＡ１．００±０．１００．９８±０．１００．２１±０．０２８９．５１５Ｎｏｔｅ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，０．０５．Ｐ＜２．３　抑制ＰＩＭ１对ＫＹＳＥ１５０细胞凋亡的影响流式细胞术检测结果显示：ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组细胞凋亡率显著高于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５），Ｃｏｎｔｒｏｌ组和ＮＣ组细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见表３、图２。珋表３　各组ＫＹＳＥ１５０细胞凋亡率比较　ｘ±ｓＴａｂ．３　ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｓｏｆＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ　珋ｘ±ｓＧｒｏｕｐＣｏｎｔｒｏｌＮＣＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡＦＰＡｐｏｐｔｏｔｉｃｒａｔｅ（％）２．１６±０．２５２．２５±０．３１１６．４９±２．１０１３４．００２ＰＩＭ１ｐｒｏｔｅｉｎ０．６１±０．０６０．６２±０．０６０．１６±０．０２８１．７５００．００００．０００　注：与Ｃｏｎｔｒｏｌ组比，０．０５。Ｐ＜　Ｎｏｔｅ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，０．０５．Ｐ＜０．０００２．２　抑制ＰＩＭ１对ＫＹＳＥ１５０细胞增殖的影响ＰＩＭ１ｓｉＲＮＡ转染ＫＹＳＥ１５０细胞２４、４８、７２ｈ后，ＭＴＴ法检测各组细胞增殖能力，结果如表２所示，转染４８和７２ｈ时ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组细胞ＯＤ值均显著低于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ　　　注：与Ｃｏｎｔｒｏｌ组比，０．０５。Ｐ＜　　　Ｎｏｔｅ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，０．０５．Ｐ＜图２　流式细胞术检测各组ＫＹＳＥ１５０细胞凋亡率Ｆｉｇ．２　ＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｔｏｄｅｔｅｃｔａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｏｆＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ２．４　抑制ＰＩＭ１对ＫＹＳＥ１５０细胞侵袭和迁移的影响Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测结果显示：ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组侵袭和迁移细胞数均显著低于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５），Ｃｏｎｔｒｏｌ组和ＮＣ组侵袭和迁移细胞数比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见表４。２．５　抑制ＰＩＭ１对ＫＹＳＥ１５０细胞中蛋白表达的影响为进一步探究ＰＩＭ１在食管癌ＫＹＳＥ１５０细胞中的作用机制，本实验采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测增殖相关蛋白ＰＣＮＡ，凋亡相关蛋白ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３，侵袭和迁移相关蛋白ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９，ＳＴＡＴ３信号通路相关蛋白ＳＴＡＴ３和ｐ－ＳＴＡＴ３表达水平，结果如图３和表５所示，ＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡ组细胞中ＰＣＮＡ、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９和ｐ－ＳＴＡＴ３蛋白表达水平

现代肿瘤医学　２０２１年２月　第２９卷第０３期　　ＭＯＤＥＲＮＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ｆｅｂ２０２１，ＶＯＬ２９，Ｎｏ０３均低于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５），ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３蛋白表达水平高于Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０５），ＳＴＡＴ３蛋白表达水平与Ｃｏｎｔｒｏｌ组无明显改变（Ｐ＞０．０５）；Ｃｏｎｔｒｏｌ组和ＮＣ组细胞中以上各蛋白表达水平比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。珋表４　各组侵袭和迁移细胞数比较　ｘ±ｓＴａｂ．４　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｉｎｖａｄｉｎｇａｎｄｍｉｇｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｓｉｎｅａｃｈ珋ｇｒｏｕｐ　ｘ±ｓＧｒｏｕｐＣｏｎｔｒｏｌＮＣＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡＦＰＮｕｍｂｅｒｏｆｉｎｖａｄｉｎｇｃｅｌｌｓ５６．１６±６．０５５４．７８±５．８６２０．３４±３．１２４５．９４４０．０００·３９５·Ｎｕｍｂｅｒｏｆｍｉｇｒａｔｅｄｃｅｌｌｓ８６．２２±７．８８８２．９５±８．２５３１．４８±３．５５５９．４３２０．０００图３　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中蛋白表达情况Ｆｉｇ．３　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐｏｆｃｅｌｌｓ　注：与Ｃｏｎｔｒｏｌ组比，０．０５。Ｐ＜　Ｎｏｔｅ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，０．０５．Ｐ＜珋表５　各组ＫＹＳＥ１５０细胞蛋白表达水平比较　ｘ±ｓ珋Ｔａｂ．５　ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＫＹＳＥ１５０ｃｅｌｌｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ　ｘ±ｓＧｒｏｕｐＣｏｎｔｒｏｌＮＣＰＩＭ１－ｓｉＲＮＡＦＰＰＣＮＡ０．７４±０．０８０．７５±０．０８０．２２±０．０２６２．６５９０．０００ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３０．０６±０．０１０．０６±０．０１０．７８±０．０７３０４．９４１０．０００ＭＭＰ－２０．５２±０．０５０．４９±０．０５０．２０±０．０２５２．０５６０．０００ＭＭＰ－９０．０６０．６３±０．６０±０．０７０．３２±０．０３２７．９８９０．００１ＳＴＡＴ３０．９２±０．０９０．９３±０．０９０．９０±０．０９０．０８６０．９１８ｐ－ＳＴＡＴ３０．２５±０．０３０．２３±０．０２０．０９±０．０１４８．８５７０．０００　　　注：与Ｃｏｎｔｒｏｌ组比，０．０５。Ｐ＜　　　Ｎｏｔｅ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，０．０５．Ｐ＜３　讨论食管癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，其预后极差，严重影响着人类的健康和生命。随着对食管癌发病机制研究的深入，发现如表观遗传修饰、基因表达调控等可为食管癌早期诊断、基因治疗等提供作用靶点［１１－１２］２３］引发级联反应，诱导细胞发生凋亡［。ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９均属于基质金属蛋白酶家族，它们具有分解细胞外基质和基２４］底膜的作用，与肿瘤细胞侵袭和迁移密切相关［。本实验通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞中增殖相关蛋白ＰＣＮＡ、凋亡相关蛋白ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３以及侵袭和迁移相关蛋白ＭＭＰ－２及ＭＭＰ－９表达水平，结果发现，抑制ＰＩＭ１的表达可下调ＰＣＮＡ、ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９蛋白表达，上调ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３蛋白表达，本实验结果提示ＰＩＭ１可能通过调控ＰＣＮＡ、ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３、ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９蛋白表达参与调节食管癌ＫＹＳＥ１５０细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移。ＳＴＡＴ３信号通路在人类多种类型肿瘤中过度激活，在肿瘤发生和发展中具有促进作用。ＺＨＯＵ等研究显示，特异性抑制ＳＴＡＴ３可诱导食管癌细胞ＥＣＡ１０９凋亡和细胞周期停滞，并抑制细胞的２５］迁移能力［。本实验结果显示，抑制ＰＩＭ１的表达后。近年来，ＰＩＭ家族丝氨酸／苏氨酸激酶已成为癌症研究的焦点。ＰＩＭ１是一种原癌基因，其编码具有多种细胞功能的丝氨酸／苏氨酸激酶属于ＰＩＭ家族成员，涉及细胞增殖、凋亡、转移和肿瘤进展等［１３－１４］。ＰＩＭ１通过磷酸化ＣＤＣ２５Ａ、ＣＤＣ２５Ｃ、ｐ２１ｃｉｐ１、［６，１５］ｐ２７ｋｉｐ１和ｃ－ＴＡＫ１促进细胞周期进程，此外，其在肿瘤细胞耐药中也扮演重要角色。ＰＩＭ１在许多类型的癌细胞中过表达，包括肝细胞癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤、肺癌、乳腺１６－１９］癌和结直肠癌，其过表达与肿瘤发生和进展相关［。以往研究显示，ＰＩＭ１在食管癌组织和细胞中呈高表达，与食管２０－２１］癌发生、发展及预后密切相关［。本实验结果发现，转染ＫＹＳＥ１５０细胞中ＳＴＡＴ３磷酸化水平显著降低，而总ＳＴＡＴ３无明显改变，表明ＰＩＭ１可能通过调控ＳＴＡＴ３信号通路调控食管癌ＫＹＳＥ１５０细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移。综上，抑制ＰＩＭ１基因可能通过阻碍ＳＴＡＴ３信号通路的激活调控食管癌ＫＹＳＥ１５０细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移。本实验为进一步研究ＰＩＭ１在食管癌发病机制中的作用提供了新思路。随着对ＰＩＭ１基因研究的深入，相信ＰＩＭ１基因可能成为食管癌的早期诊断和基因治疗的作用靶点。【参考文献】［１］　ＬＥＥＫ，ＫＩＭＨＲ，ＰＡＲＫＳＩ，ｅｔａｌ．Ｓｕｒｇｉｃａｌｏｕｔｃｏｍｅｏｆｃｏｌｏｎｉｎｔｅｒｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｓｕｒｇｅｒｙ：ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｆｏｒＰＩＭ１ｓｉＲＮＡ能够抑制ＫＹＳＥ１５０细胞ＰＩＭ１的表达，抑制ＰＩＭ１的表达后ＫＹＳＥ１５０细胞增殖、侵袭和迁移能力明显降低，凋亡水平升高，这与之前关于ＰＩＭ１促进食管癌发生和发展的研究相符。但关于ＰＩＭ１基因在食管癌中的作用机制目前尚不十分清楚，因此本实验通过沉默ＰＩＭ１基因观察对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响，并初步探讨其作用机制。ＰＣＮＡ是目前公认的细胞处于增殖状态的标志物，常用于肿瘤细胞增殖检测［２２］。Ｃａｓｐａｓｅ－３是目前与细胞凋亡相关研究最多的蛋白，是细胞凋亡的执行者。当细胞受到凋亡信号刺激时，激活Ｃａｓｐａｓｅ－３形成ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ－３，继而

·３９６·徐汉桥，等　　ＰＩＭ１基因通过调控ＳＴＡＴ３信号通路蛋白表达对食管癌细胞生物学行为的影响ｏｆＰＩＭ１ｋｉｎａｓｅｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗｉｔｈＡＴＰ－ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．ＳｃｉＲｅｐ，２０１７，７（１）：１３３９９－１３４１０．［１５］　ＭＡＷＡＳＡＳ，ＡＭＡＴＹＡＶＪ，ＳＵＺＵＫＩＲ，ｅｔａｌ．ＰＩＭ１ｋｎｏｃｋｄｏｗｎｉｎｈｉｂｉｔｓｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＯｎｃｏｌ，２０１７，５０（３）：１０２９－１０３４．［１６］　ＺＨＡＯＷ，ＱＩＵＲ，ＬＩＰ，ｅｔａｌ．ＰＩＭ１：Ａｐｒｏｍｉｓｉｎｇｔａｒｇｅｔｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＭｅｄＯｎｃｏｌ，２０１７，３４（８）：１４２－１４７．［１７］　ＩＹＥＲＲＳ，ＣＨＡＴＨＡＭＬ，ＳＬＥＩＧＨＲ，ｅｔａｌ．ＡｆｕｎｃｔｉｏｎａｌＳＵＭＯ－ｍｏｔｉｆｉｎｔｈｅａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｏｆＰＩＭ１ｐｒｏｍｏｔｅｓｉｔｓｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｖｉａＲＮＦ４，ａｎｄｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＳｃｉＲｅｐ，２０１７，７（１）：３５９８－３６１０．［１８］　ＹＥＣ，ＺＨＡＮＧＣ，ＨＵＡＮＧＨ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｎａｔｕｒａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｍｙｒｃｏｎｄｕｉｔ－ｒｅｌａｔｅｄｍｏｒｂｉｄｉｔｙ［Ｊ］．ＴｈｏｒａｃＣａｒｄｉｏｖａｓｃＳｕｒｇ，２０１７，６６（０５）：３８４－３８９．［２］　ＨＡＳＳＡＮＩＰＯＵＲＳ，ＦＡＴＨＡＬＩＰＯＵＲＭ，ＳＡＬＥＨＩＮＩＹＡＨ．ＴｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｉｎＩｒａｎ：Ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗａｎｄｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＨｅａｌｔｈＰｒｏｍｏｔｉｏｎＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，２０１７，６（２）：４１－４５．［３］　ＴＨＵＭＡＬＬＡＰＡＬＬＹＮ，ＭＥＳＨＲＥＦＡ，ＭＯＵＳＡＭ，ｅｔａｌ．Ｓｕｒｖｉｖａｌｂｅｎｅｆｉｔｏｆｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔｖｅｒｓｕｓａｄｊｕｖａｎｔｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙｉｎｌｙｍｐｈｎｏｄｅｐｏｓｉｔｉｖｅｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ：ａｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｂａｓｅｄａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＪＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔＯｎｃｏｌ，２０１７，８（５）：８２５－８３２．［４］　ＮＡＲＬＩＫ－ＧＲＡＳＳＯＷＭ，ＢＬＡＮＣＯ－ＡＰＡＲＩＣＩＯＣ，ＣＡＲＮＥＲＯＡ．ＴｈｅＰＩＭｆａｍｉｌｙｏｆｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅｋｉｎａｓｅｓｉｎｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＭｅｄＲｅｓＲｅｖ，２０１３，３４（１）：１３６－１５９．［５］　ＬＩＪＱ，ＹＡＮＧＸ，ＺＨＯＵＸＭ．ＰＩＭ１ｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＥｃａ－１０９［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＢｉｏｍａｒｋｅｒ，２０１７，１８（２）：１４９－１５４．［６］　ＭＯＬＯＧＮＩＬ，ＭＡＧＩＳＴＲＯＮＩＶ，ＣＡＳＵＳＣＥＬＬＩＦ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｎｏｖｅｌＰＩＭ１ｉｎｈｉｂｉｔｏｒＮＭＳ－Ｐ６４５ｒｅｖｅｒｓｅｓＰＩＭ１－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｎＴＭＰＲＳＳ２／ＥＲＧｐｏｓｉｔｉｖｅｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｓｈｏｗｓａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈＰＩ３Ｋｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＣａｎｃｅｒ，２０１７，８（１）：１４０－１４５．［７］　ＺＨＡＮＧＭ，ＬＩＵＴ，ＳＵＮＨ，ｅｔａｌ．Ｐｉｍ１ｓｕｐｐｏｒｔｓｈｕｍａｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｇｒｏｗｔｈｄｕｒｉｎｇｇｌｕｃｏｓｅｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎｂｙｅｎｈａｎｃｉｎｇｔｈｅＷａｒｂｕｒｇｅｆｆｅｃｔ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＳｃｉ，２０１８，１０９（５）：１４６８－１４７９．［８］　ＭＡＨＯＮＹＲ，ＧＡＲＧＡＮＳ，ＲＯＢＥＲＴＳＫＬ，ｅｔａｌ．Ａｎｏｖｅｌａｎｔｉ－ｖｉｒａｌｒｏｌｅｆｏｒＳＴＡＴ３ｉｎＩＦＮ－αｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌＭｏｌＬｉｆｅＳｃｉ，２０１７，７４（９）：１－１０．［９］　ＹＡＮＧＪＧ，ＬＵＲ，ＹＥＸＪ，ｅｔａｌ．ＩｃａｒｉｔｉｎｒｅｄｕｃｅｓｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｖｉａｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉ，２０１７，１８（１）：１３２－１４１．［１０］　ＰＡＵＬＩＮＲ，ＣＯＵＲＢＯＵＬＩＮＡ，ＭＥＬＯＣＨＥＪ，ｅｔａｌ．Ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｓａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｓｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－３／ｐｉｍ１ａｘｉｓｐｌａｙｓａｃｒｉｔｉｃａｌｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｐｕｌｍｏｎａｒｙａｒｔｅｒｉａｌｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２０１１，１２３（１１）：１２０５－１２１５．［１１］　ＳＨＩＭＡＤＡＨ．ｐ５３ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｐｐｒｏａｃｈｔｏｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＡｎｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＳｕｒｇ，２０１８，２（４）：２６６－２７３．［１２］　ＤＩＰＭ，ＣＡＮＴＯＭＩ，ＦＩＴＺＧＥＲＡＬＤＲＣ．Ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｅａｒｌｙａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｏｆｔｈｅｅｓｏｐｈａｇｕｓ－ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１７，１５４（２）：４２１－４３６．［１３］　ＹＡＮＧＪ，ＬＩＵＫ，ＹＡＮＧＪ，ｅｔａｌ．ＰＩＭ１ｉｎｄｕｃｅｓｃｅｌｌｕｌａｒｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｔｈｒｏｕｇｈｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆＵＨＲＦ１ａｔＳｅｒ３１１［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０１７，３６（３４）：４８２８－４８４２．［１４］　ＢＯＧＵＳＺＪ，ＺＲＵＢＥＫＫ，ＲＥＭＢＡＣＺＫＰ，ｅｔａｌ．ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎａｌｙｓｉｓｉｃｅｔｉｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｐｒｅｓｓｅｓｔｈｅｍａｌｉｇｎａｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＰＩＭ１ａｎｄｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇｔｈｅＰＩＭ１／ＣＸＣＲ４ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌＢｉｏｃｈｅｍ，２０１８，４８（３）：１２３０－１２４４．［１９］　ＧＵＯＳ，ＦＡＮＪ，ＷＡＮＧＢ，ｅｔａｌ．Ｈｉｇｈｌｙｓｅｌｅｃｔｉｖｅｒｅｄ－ｅｍｉｔｔｉｎｇｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｂｅｆｏｒｉｍａｇｉｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｉｎｓｉｔｕｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇＰｉｍ－１ｋｉｎａｓｅ［Ｊ］．ＡｃｓＡｐｐｌＭａｔｅｒＩｎｔｅｒｆａｃｅｓ，２０１８，１０（２）：１４９９－１５０７．［２０］　陈建丽，陈晓文．Ｐｉｍ１蛋白在食管不同病变组织中的表达及临床意义［Ｊ］．新乡医学院学报，２０１８，３５（３）：２０１－２０３．ＣＨＥＮＪＬ，ＣＨＥＮＸＷ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＰｉｍ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｓｏｐｈａｇｅａｌｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，２０１８，３５（３）：２０１－２０３．［２１］　ＨＡＮＹ，ＹＡＮＧＸ，ＺＨＡＯＮ，ｅｔａｌ．ＡｌｐｉｎｕｍｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｂｙｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｍｉＲ－３７０／ＰＩＭ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．ＡｍＪＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２０１６，６（１２）：２７５５－２７７１．［２２］　ＣＨＯＥＫＮ，ＭＯＬＤＯＶＡＮＧＬ．Ｆｏｒｇｉｎｇａｈｅａｄｔｈｒｏｕｇｈｄａｒｋｎｅｓｓ：ＰＣＮＡ，ｓｔｉｌｌｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐａｌｃｏｎｄｕｃｔｏｒａｔｔｈｅｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｋ［Ｊ］．ＭｏｌＣｅｌｌ，２０１７，６５（３）：３８０－３９２．［２３］　ＷＡＮＧＹ，ＧＡＯＷ，ＳＨＩＸ，ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｄｒｕｇｓｉｎｄｕｃｅｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈｃａｓｐａｓｅ－３ｃｌｅａｖａｇｅｏｆａｇａｓｄｅｒｍｉｎ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０１７，５４７（７６６１）：９９－１０３．［２４］　ＰＩＲＯＭＫＲＡＩＰＡＫＰ，ＳＡＮＧＰＡＩＲＯＪＫ，ＴＩＲＡＫＯＴＡＩＷ，ｅｔａｌ．Ｃｙｓｔｅｉｎｙｌｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓｉｎｈｉｂｉｔｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎ，ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＭＰ－２／９ｉｎｈｕｍａｎｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ［Ｊ］．ＣｅｌｌＭｏｌＮｅｕｒｏｂｉｏｌ，２０１８，３８（２）：５５９－５７３．［２５］　ＺＨＯＵＣ，ＭＡＪ，ＳＵＭ，ｅｔａｌ．Ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳＴＡＴ３ｉｎｄｕｃｅｓｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄＧ１ｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｒｒｅｓｔｉｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａＥＣＡ１０９ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＩｎｔ，２０１８，１８（１）：５３－６４．（编校：徐萌）