GPER抑制PTX对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

2024年2月3日发(作者：)

多百函复一玖，７曼凋亡的影响研究生。／，一一、－一一—、～ＧＰＥＲ抑制剂ＰＴＸ对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增摘要的影响，探讨阻断ＧＰＥＲ介导的信号通路治疗子宫内膜癌的可能性。ｔｏｘｉｎ，ＰＴＸ）对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖凋亡和细胞周期素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓＨＥＣ．１Ａ细胞，采用ＭＴＴ法和流式细胞技术，通过观察ＧＰＥＲ抑制剂百日咳毒亡的影响国内外报道极少。本实验应用体外培养的子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ和细胞增殖过程，但阻断ＧＰＥＲ介导的信号传导通路，对子宫内膜癌细胞增殖凋进了子宫内膜癌的发生。上述研究表明，ＧＰＥＲ可能介导了雌激素促子宫内膜癌提示ＧＰＥＲ极可能介导了Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ通路活化，促表达与ＡＫＴ表达相一致，期研究中发现，雌激素作用于子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞和ＨＥＣ．１Ａ细胞后，ＧＰＥＲ腺癌细胞增殖，减少其凋亡，与癌发生发展密切相关。本课题组其他人员在前Ｖｉｖａｃｑｕａ等研究发现，雌激素通过与ＧＰＥＲ结合可促进子宫内膜癌细胞和甲状制氧化应激诱导的细胞凋亡，增加细胞周期蛋白Ｄ的表达，促进细胞生长发育。Ｋａｎｄａ等研究发现，雌激素作用于ＧＰＥＲ受体，促进凋亡蛋白Ｂｃｌ．２的表达，抑ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＥＲ）。ｅｓｔｒｏｇｅｎｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ现又被称为Ｇ蛋白偶联雌激素受体（Ｇ受体，曾被命名为Ｇ蛋白偶联受体３０（ＧＰＲ３０），因其介导雌激素的非核效应，国内外研究的热点，经研究发现介导该效应的物质分子可能是一种新型雌激素癌的作用机理包括经典的核转录效应和非核效应。雌激素的非核效应是近年来缺乏孕激素拮抗的机体患子宫内膜癌的几率增加，高水平雌激素诱发子宫内膜子宫内膜癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，长期高水平雌激素刺激而背景与目的：摘要马秀英

１．体外培养子宫内膜癌细胞系Ｉｓｈｋａｗ瘌ＨＥＣ１０。６ｍｏｌ／ＬＸ率差异均无统计学意义（Ｆ＝１．９７８，Ｐ＝０．１３７）。在ｌＨＥＣ．１Ａ细胞促增殖作用不显著（Ｆ＿ｏ．９５５，Ｐ＝０．３９３），且５个浓度问细胞增值性（Ｆ＿２１２．１３２，Ｐ＜０．００１）和浓度依赖性（Ｆ＝１２８．９５４，Ｐ＜０．００１）特点；而对１３．Ｅ２对Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞的促增殖作用呈时间依赖差异具有统计学意义，即１７长和浓度升高，细胞增值率均增加，且不同时间点和不同浓度间细胞增值率１３一Ｅ２具有促进Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞增殖的作用，随作用时间延１．ＭＴＴ实验结果：１７实验结果：ｌＡ。Ｖ－ＦＩＴＣ流式细胞术检测细胞凋亡４．Ａｎｎｅｘｉｎ３．流式细胞仪测定子宫内膜癌细胞周期。２．ＭＴＴ法测定细胞生长。实验方法：ＩＩ３．细胞凋亡检测结果：ＰＴＸ对子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ、ＨＥＣ一１Ａ细胞的促凋亡作异无统计学意义。对细胞周期Ｇｏ，－Ｇｌ期、Ｓ期作用的差异有统计学意义，对Ｇ２￣Ｍ期作用的差有统计学意义，对Ｓ期作用的差异则无统计学意义；在ＨＥＣ．１Ａ细胞，ＰＴＸ１３．Ｅ２作用下，ＰＴＸ对Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞周期Ｇｏ－－Ｇｌ期、Ｇ２－Ｍ期作用的差异均（Ｐ＞０．０５）。（２）ＰＴＸ对子宫内膜癌细胞周期分布的影响：在１×１０。６ｍｏｌ／Ｌ１３．Ｅ２对细胞周期的作用差异均无统计学意义ＨＥＣ．１Ａ细胞，不同浓度１７且不同浓度间的差异具有统计学意义，Ｇ２～Ｍ期差异无统计学意义；在１３．Ｅ２浓度增加，Ｇｏ￣Ｇｌ期比例下降，Ｓ期比例升高，Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，随着１７１３．Ｅ２对子宫内膜癌细胞周期分布的影响：在２．细胞周期分析结果：（１）１７Ｐ＜０．００１；Ｆ＝４２４．５６１，Ｐ＜０．００１）特点。（Ｆ＝４７．４２８，Ｐ＜０．００１；Ｆ＝１２３．３９５，Ｐ＜０．００１）和浓度依赖性（Ｆ＝４９５．４３７，间的差异均有统计学意义，即ＰＴＸ对两种细胞增殖的抑制作用呈时间依赖性下，ＰＴＸ对Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ细胞增殖抑制作用在不同时间点和不同浓度１３一Ｅ２作用１７

———————～～—————————一群冬造乌．铋灾宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞、ＨＥＣ．１Ａ细胞；细胞增殖；细胞周期；细胞凋亡关键词：Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）；百日咳毒素（ＰＴＸ）；雌激素；子实现的。阻断ＧＰＥＲ介导的信号传导通路可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。展，促使细胞发生凋亡，其作用极可能是通过阻断ＧＰＥＲ介导的信号传导通路ＰＴＸ可抑制１７Ｂ．Ｅ２对子宫内膜癌细胞的促细胞增殖作用，阻滞细胞周期进依赖性的特点。１３．Ｅ２的作用未表现出明显的浓度依赖性和时间效应机制促进细胞增殖，故对１７１３．Ｅ２只能通过非转录殖、促使细胞周期进展；在ＨＥＣ一１Ａ细胞（ＥＲ阴性），１７１３一Ｅ２通过转录效应和非转录效应共同促进细胞增Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞（ＥＲ阳性），１７ｔ３．Ｅ２的转录效应是ＥＲ依赖性的，其非转录效应是ＥＲ非依赖性的。在为１７及对细胞周期进展作用的差异，可能是由于两种细胞内ＥＲ水平不同导致的，因Ｂ—Ｅ２）对子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞和ＨＥＣ．１Ａ细胞促增殖作用雌激素（１７结论：用的差异均有统计学意义。随着ＰＴＸ浓度增加，细胞凋亡逐渐增加。摘要ＩＩＩ

７ｐ－·ｅｓｔｒａｄｉｏｌ－－ｉｎｄｕｃｅｄｐｅｌｌｓＧｏｆＥｆｆｅｃｔＡｂｓｔｒａｃｔ１ｏｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒＯｃｅｌｌｓｃｅｌｌｓｌｓｈｉｋａｗａＨＥＣ．１ＡａｎｄＩｓｈｉｌ盈ｉｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｂｏｄｙａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，ｔｈｅｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｌａｃｋｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓｈｉｇｈＬｏｎｇ－ｔｅｒｍｓｙｓｔｅｍ．ＵｎｄｅｒｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｆｅｍａｌｅｔｕｍｏｒｓｍａｌｉｇｎａｎｔｍａｊｏｒｔｈｒｅｅｏｎｅＩＳｃａｎｃｅｒＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌＡｂｓｔｒａｃｔｎａｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＧＰＥＲ）ｉｓｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄｅｆｆｅｃｔｓ．Ｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｎｏｎ－ｇｅｎｅｅｆｆｅｃｔｓ’’ａｎｄｔｈｅｏｒｙ‘‘ｎｕｃｌｅａｒｃｌａｓｓｉｃｉｎｃｌｕｓｅｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｃａｌｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｌｓｏａｆｔｅｒｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｉｎＡＫＴｇｒｏｕｐｒｅｓｅａｒｃｈｏｕｒｃａｎｃｅｒ．Ｐｒｅｖｉｏｕｓｒｅｌａｔｅｄｄｉｒｅｃｔｌｙｒｅｄｕｃｅｓｉｎｄｕｃｅｓｃａｒｃｉｎｏｍａｔｈｙｒｏｉｄｃａｎｃｅｒｃｏｍｂｉｎｉｎｇｐｒｏｖｅｄｅｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｖｉｖａｃｑｕａｓｔｒｅｓｓ—ｉｎｄｕｃｅｄｏｘｉｄａｔｉｖｅＤ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｃｙｃｌｅＢｃｌ－２ｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｔｏｃａｕｓｅｃａｎａｃｔｉｎｇｅｓｔｒｏｇｅｎｆｏｕｎｄｅｔｃ３０（ＧＰＲ３０）．ＫａｎｄａａｃｔｉｖａｔｅｄｐＧｔｈｅｏｂｓｅｒｖｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｆａｒ．ＴｈｉｓＳＯｒｅｐｏｒｔｅｄｈａｓｎ＇ｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｂｙｅｆｆｅｃｔｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅｇｒｏｗｔｈｃｅｌｌｐｒｏｇｒａｍｉｎｄｕｃｅｍａｙｓｈｏｗｎｈａｖｅｓｔｕｄｉｅｓｃａｎｃｅｒ．ＡｂｏｖｉｎｇｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｐｒｏｍｏｔｅｄａｎｄｐａｔｈｗａｙＰ１３Ｋ／ＡｋｔｍｅｄｉａｔｅｄｌｉｋｅｌｙｖｅｒｙｉｓＧＰＥＲｔｈａｔ７１ｏｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｃＡＨＥＣ－１Ｉｓｈｋａｗａ１．ＣｕｌｔｕｒｉｎｇＭｅｔｈｏｄｓｃａｎｃｅｒ．ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃｕｒｉｎｇｐａｔｈｓｉｇｎａｌＧＰＥＲ－ｉｎｄｕｃｅｄｂｌｏｃｋｉｎｇｏｆｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙｄｉｓｃｕｓｓｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｃｅｌｌｓＨＥＣ－１ＡＩｓｈｉｋａｗａｉｎａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＩＩｂｏｄｙ．ｔｈｅｏｕｔｓｉｄｅｈａｎｃｅｅｗｅｌｌｓ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄｒｏｔｅｉｎ—ｃｏｕｐｌｅｄｂｊｅｃｔｉｖｅ１３一ｅｓｔｒｏｇｅｎ１３·－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ－－ｉｎｄｕｃｅｄ

Ａｂｓｔｒａｃｔ２．ＤｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇＩｓｈｋａｗａａｎｄＨＥＣ一１ＡｃｅｌｌｓｇｒｏｗｔｈｂｙＭＴＴｍｅｔｈｏｄ．３．ＤｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｃｙｃｌｅｗｉｍＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ．ｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ．４．ＴｈｅＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｔｏＲｅｓｕｌｔｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓＤｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＭＴＴｍｅｔｈｏｄ：Ｅ２ｈａｓｅｆｆｅｃｔｏｎｐｒｏｍｏｔｉｎｇｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓｓｈｏｗｉｎｇｔｈｅｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ（Ｆ＝２１２．１３２，Ｐ＜０．００１）ｒｏｌｅｉｎＨＥＣｎｏａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ①＝１２８．９５４，Ｐ＜０．００１），ｗｈｉｌｅｔｈｅＷａｓｎｏｔ－１Ａｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｆ＝０．９５５，Ｐ＝０．３９３），ａｎｄｔｈｅｒｅＷａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（Ｆ＝１．９７８，Ｐ＝０．１３７）ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓａｍｏｎｇｏｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅａｃｔｉｏｎｏｆ１０。６ｍｏｌ／ＬＥ２，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰＴＸＨＥＣ－１ＡｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｈａｓａＩｓｈｉｋａｗａａｎｄｔｉｍｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ（Ｆ＝４７．４２８，Ｐ＜０．００１；Ｆ＝１２３．３９５，Ｐ＜０．００１）ａｎｄＦ＝４２４．５６１，Ｐ＜０．００１）．ａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ（Ｆ＝４９５．４３７，Ｐ＜０．００１：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｎａｌｙｓｉｓ：１．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＥ２ｔｏｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ：ＩｎＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＥ２ｔｏＧｏ～ＧＩｐｈａｓｅａｎｄＳｐｈａｓｅｏｆｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｒｅｖｅａｌｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．ＡｓＥ２ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＧｏ～Ｇｌｐｈａｓｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｆ＝３４．０７８，Ｐ＝０．００１）ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎＳｐｈａｓｅ（Ｆ＝２０．５６８，Ｐ＝０．００２），ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅＷａｓｎｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｆ＿０．２４５，Ｐ＝０．７９０）ｉｎＧ２ｔｏＭｐｅｒｉｏｄ；ＩｎＨＥＣ－１Ａｃｅｌｌ，ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｍｏｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＥ２ｗｅｒｅｎｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＞０．０５）．ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．２．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＦＴＸｏｎｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌＵｎｄｅｒｔｈｅａｃｔｉｏｎｏｆ１０。ｏｍｏｌ／ＬＥ２ａｎｄＰＴＸｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｉｎＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓ，ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｔＧｏ～Ｇ１ｐｈａｓｅ（Ｆ－２１．０２８，Ｐ＝０．００２），Ｇ２ｔｏｎｏＭ（Ｆ２３５．５３３，Ｐ＜０．００１）ｒｅｖｅａｌｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎＳｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｗｅｒｅｐｈａｓｅ（Ｆ＝１．６６５，Ｐ＝０．２６６）；ｉｎＨＥＣ－１ＡＳｃｅｌｌ，ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｔＧｏ～Ｇ１ａｒｅｐｈａｓｅ（Ｆ＝６．８０９，Ｐ＝０．０２９）ａｎｄｐｈａｓｅ（Ｆ＝２２．２６６，Ｐ＝０．００２）ｓｈｏｗｂｏ廿１ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ，ｗｈｅｒｅａｓａｔＧ２ｔｏＭｐｈａｓｅｔｈｅｒｅｄｉｄｎ’ｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｌｔｅｒａｔｉｏｎ（Ｆ＝Ｏ．１４２；Ｐ＝０．８７０）．３．ＡｃｔｉｏｎｏｆＰＴＸｐｒｏｍｏｔｉｎｇｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｆｏｒｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｒｃｉｎｏｍａＩｓｈｉｋａｗａＩＩＩ

ＡｂｓｔｒａｃｔｏｆＰＴＸ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＦ＝８２．０６９，Ｐ＜０．００１），、析ｔｌｌ１；ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ（Ｆ－２７．２９４，Ｐ＜Ｏ．００ａｓｈｏｗｉｎｇａｒｅｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｆｏｒａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｍｏｔｉｎｇＰＴＸｃｅｌｌ．Ａｃｔｉｏｎｎｏｔｗｈｉｌｅｎｏｎ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｄｅｐｅｎｄｅｎｔＥ２ｅｆｆｅｃｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｃｅｌｌｓ．ＦｏｒｉｎｌｅｖｅｌｓＥＲｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｗｏｔｏｄｕｅｂｅｍａｙＨＥＣ一１ＡｂｅｔｗｅｅｎｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｃｙｃｌｅｅｅｌｌｐｒｏｆｅｒｌｉｍｔｉｏｎｃｅｌＩｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＴｈｅＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｃＡＨＥＣ－１ａｎｄＩｓｈｉｋａｗａｂｏｔｈＰＴＸ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ（Ｆ－－２７．２９４，Ｐ＜０．００１：Ｆ＝８２．０６９，Ｐ＜０．００１），、析ｔｈＩＶｃｅｌｌｃｅｌｌ：ＨＥＣ．１Ａａｐｏｐｔｏｓｉｓ；Ｉｓｈｉｋａｗａｃｙｃｌｅ；ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｃｅｌｌｃｅｌｌ；ｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｔｏｘｉｎ；ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ｐｅｒｔｕｓｓｉｓｅｓｔｒｏｇｅｎｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄＷｏｒｄｓ：ｅｓｔｒｏｇｅｎ；ＧＫｅｙｇｒａｄｕａｌｌｙ．ｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｓｅｌｌｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｅｌｌｓ

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正文部分录目综述参考文献………………………………………………………………………．３８Ｇ蛋白偶联雌激素受体ＧＰＥＲ与雌激素结合介导的非转录效应的研究………．２６综述………………………………………………………………………………………………………．．２６参考文献……………………………………………………………………………．２４结论………………………………………………………………………………………………………２３讨论…………………………………………………………………………………………………………．１６结果……………………………………………………………………………………………………………９实验材料与方法………………………………………………………………………４舌……………………………………………………………………………………………………………月ＩＪ前言…………………………………………………………………………………１一凋亡的影响………ｌＧＰＥＲ抑制剂ＰＴＸ对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、缩略词表………………………………………………………………………………Ｉ

缩略词表７ｄｅｎｙｌａｔｅ１ｉｏｄｉｄｅｐｒｏｐｉｄｉｕｍｓｕｌｐｈｏｘｉｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌ英文全称ＡＣＰＫＢＰＫＡＰ咿３Ｐ１３ＫＰＢＳ～ｍＰＫＰＴＸＧＰＲ３０ＧＰＥＲＥＲＢＥＲⅡＥＲ１７Ｂ—Ｅ２ＰＩＤＭＳＯ缩略词ｂｅｔａａｌｐｈａＧｅｓｔｒｏｇｅｎ５，４ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ－３３－ｋｉｎａｓｅｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅｓａｌｉｎｅｂｕｆｆｅｒｐｈｏｓｐｈａｔｅｋｉｎａｓｅｓｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｔｏｘｉｎｐｅｒｔｕｓｓｉｓ３０ｒｅｃｅｐｔｏｒｐＡｌ【ｉｎａＳｅｐｒｏｔｅｉｎａＢｋｉｎａｓｅ腺苷酸环化酶蛋白激酶Ｂ蛋白激酶Ａ磷脂酰肌醇３，ｇ，５．磷酸磷脂酰肌醇３激酶磷酸盐缓冲液丝裂原激活蛋白激酶百日咳毒素Ｇ蛋白偶联受体３０Ｇ蛋白偶联雌激素受体雌激素受体亚型ｐ雌激素受体亚型位雌激素受体雌二醇碘化丙二甲基亚砜中文全称ｃｙｃｌａｓｅｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ－ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｒｏｔｅｉｎ１３－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ

可快速激活子宫内膜癌细胞中Ｐ１３眦Ｔ信号传导通众环ｆ６吾刖．ｔＬ—ＪＬ．凋亡的影响ＧＰＥＲ抑制剂ＰＴＸ对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、英砬分够拭（ＥＲ＋）是雌激素受体依赖性的，对于ＨＥＣ．１Ａ细胞（ＥＲ■）则不依赖于雌激素１３．Ｅ２现，最终产生促进细胞生长增殖的生物学效应。郭瑞霞等【４－５Ｊ研究发现１７主要通过雌激素快速激活细胞内Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ信号转导通路和细胞外ＥＲＫ通路实究发现【ｌ弓ｊ，雌激素除了经典的核转录效应外，还具有“非转录效应”，该效应雌激素除了“核转录效应”外，还可能通过其他作用机制发挥效应。近年来研无效，而一些雌激素受体（ＥＲ）阴性患者对雌激素拮抗剂有效。上述现象说明疗子宫内膜癌和乳腺癌时，有些雌激素受体（ＥＲ）阳性的患者对雌激素拮抗剂性肿瘤时显示出的一些现象无法用上述理论解释，比如，应用雌激素拮抗剂治效应”或“基因组效应”。然而，临床上应用抗雌激素药物治疗一些激素依赖因转录、引发相应蛋白表达，该作用过程主要在细胞核内完成，故称“核转录过程同时使Ｅ２一ＥＲ复合物与靶基因上雌激素反应原件（ＥＩ也）结合，进而激活基体（ＥＲ）结合形成Ｅ２．ＥＲ复合物，后者促使受体一蛋白构象改变和二聚体化，该雌激素致子宫内膜癌的发病机制：传统理论认为，雌激素（Ｅ２）与雌激素受发病年龄呈年轻化趋势，子宫内膜癌已严重威胁了女性的健康和生命。疾病和分泌雌激素的肿瘤的发生等均可导致子宫内膜癌的发病率增加，并且使增加。人类平均寿命的延长、临床应用雌激素治疗围绝经期综合症、无排卵性处于高水平雌激素作用而无孕激素拮抗内环境的机体患子宫内膜癌的机率大大研一究生师一郑一州马乔一秀玉１～河所周知，子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的三大恶性肿瘤之一，长期导一南

细胞ＭＣＦ一７中ＧＰＥＲ参与了雌激素活化腺苷酸环化酶的过程Ｋａｎｄａ等惭究发现，雌激素通过与ＧＰＥＲ结合可促进子宫内膜癌细胞和甲状腺癌细胞增殖，达，抑制氧化应激诱导的细胞凋亡，从而促进细胞生长发育。Ｖｉｖａｃｑｕａ［１１１等研究现，雌激素与ＧＰＥＲ结合后，通过促进凋亡蛋白Ｂｃｌ－２和增加细胞周期蛋白Ｄ的表ＧＰＥＲ表达后，细胞便失去了雌激素活化腺苷酸环化酶的能力，表明在人乳腺癌导通路，应用ＥＲ拮抗剂抑制ＥＲ表达后，雌激素仍可活化腺苷酸环化酶，而抑制Ａ，ＰＫＡ）信号传ｋｉｎａｓｅｃｙｃｌａｓｅ，ＡＣ），进而激活蛋白激酶Ａ（ｐｒｏｔｅｉｎｄｅｎｙｌａｌｅ乳腺癌细胞株ＭＣＦ－７（ＥＲ和ＧＰＥＲ均阳性表达），可诱导活化腺苷酸环化酶（ａ说明ＧＰＥＲ具有与雌激素结合的特定结构。Ｆｉｌａｒｄｏ掣９１研究发现：雌激素作用于人能，再给予ＧＰＥＲ干扰分子，又会使人类胚胎肾细胞失去与雌激素结合的能力，入转染ＧＰＥＲ的ｅＤＮＡ分子后，发现人胚胎肾细胞就拥有了与雌激素结合的性有很强的结合力；而在人类胚胎肾细胞中（ＧＰＥＲ蛋白与ＥＲ均阴性表达），导乳腺癌细胞系ＳＫＢＲ３中（ＧＰＥＲ蛋白阳性表达而ＥＲ阴性表达），细胞膜与雌激素特征和结构，但与核雌激素受体（ｎＥＲ）又无相关性，Ｔｈｏｍａｓ等圈研究发现，在人瘤细胞中呈过度表达。ＧＰＥＲ是一种新型雌激素受体，具备与雌激素结合的所有多项研究还证实了ＧＰＥＲ在甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌等恶性肿前能够证实有ＧＰＥＲ表达的组织包括乳腺、卵巢、胎盘、前列腺、子宫等ｐＪ。与靶组织中雌激素含量相关，雌激素含量高的组织中ＧＰＥＲ的表达量较高。目脑组织、心、肝、肾、肺脏以及前列腺组织和胎盘组织等，并且ＧＰＥＲ的表达个跨膜螺旋受体家族的成员之一）。ＧＰＥＲ在机体组织中的分布十分广泛，包括型的雌激素受体，也被称为Ｇ蛋白偶联受体３０（ＧＰＲ３０），其基因位于７ｐ２２，是７ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＥＲ）是一种新ｅｓｔｒｏｇｅｎｃｏｕｐｌｅｄｐｒｏｔｅｉｎＧ蛋白偶联雌激素受体（Ｇ效应是由什么物质介导产生的一直是国内外学者研究的热点。近年来研究发现，既往研究已证实了雌激素致子宫内膜癌的“非转录效应”是存在的，但该子宫内膜癌提供新途径。发病机理的一种新理论，有效补充了传统理论的不足，该理论可能对有效防治应”或“非基因组效应”。子宫内膜癌“非转录效应＂发病机制是子宫内膜癌信号传导通路与基因转录、翻译等过程无关，所以又将该效应称为“非转录效磷酸化，即激活ＥＲＫ／ＭＡＰＫ通路。因为雌激素快速激活Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ和ＥＲＫ／ＭＡＰＫ通过细胞膜受体使ＥＲＫｌ／２磷酸化，磷酸化的ＥＲＫｌ／２表达上调，进而使ＭＡＰＫ受体的表达。此外，另有研究发现【６Ｊ，在子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，雌激素可以

３ＧＰＥＲ介导的信号通路治疗子宫内膜癌的可能性。ＰＴＸ）对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖凋亡和细胞周期的影响，探讨阻断ｔｏｘｉｎ，ＭＴＴ法和流式细胞技术，通过观察ＧＰＥＲ抑制剂百日咳毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ报道极少。本实验应用体外培养的子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ一１Ａ细胞，采用但阻断ＧＰＥＲ介导的信号传导通路，对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响国内外癌的发生。上述研究表明，ＧＰＥＲ可能介导了雌激素促子宫内膜癌细胞增殖过程，提示ＧＰＥＲ极可能介导了Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ通路活化，促进了子宫内膜表达相一致，雌激素作用于子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞和ＨＥＣ一１Ａ细胞后，ＧＰＥＲ表达与ＡＫＴ２。，减少其凋亡，与癌发生发展密切相关。本课题组其他人员在前期研究中发现【ｌ前言

实验材料与方法４本实验所用仪器和设备均来自河南省重点实验室，主要包括：１．４主要仪器与大型设备ＰＩ用无菌注射用水配成０．１ｍｇ／ｍｌ储存液，４。Ｃ冰箱避光保存。ＭＴＴ以ＰＢＳ配制成５ｍｇ／ｍｌ试剂，４℃冰箱内避光保存。百日咳毒素（ＰＴＸ）以原液状态（浓度为０．２ｍｇ／ｍ１）保存于．２０。Ｃ冰箱。１３．Ｅ２以无菌注射用水配成１０。２ｍｏｌ／Ｌ储存液，室温避光保存。１７１．３该实验所用到的主要试剂配制及保存方法Ｖ—ＦＩＴＣ凋亡检测试剂盒购于南京凯基生物科技有限公司；Ａｎｎｅｘｉｎ胰蛋白酶购于北京索莱宝科技有限公司；ＲＮＡ酶购自美国Ｓｉｇｍａ公司；碘化丙啶口Ｉ）购自美国Ｓｉｇｍａ公司；四甲基亚唑蓝（ＭＴＴ）购自美国Ｓｉｇｍａ公司；磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）购于北京索莱宝科技有限公司；二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）购于北京索莱宝科技有限公司；百日咳毒素（ＰＴＸ）购自美国Ｓｉｇｍａ公司；无支原体胎牛血清购于杭州四季青生物有限公司；１３．Ｅ２购自美国Ｓｉｇｍａ公司；水溶性１７ＤＭＥＭ培养基购于北京索莱宝科技有限公司；１．２主要试剂子宫内膜癌细胞系ＨＥＣ一１Ａ和ＩｓｈＩｋａｗａ购自北京大学人民医院妇科实验室。１．１细胞系１．实验材料实验材料与方法

生长和贴附生长，本实验所用Ｉｓｌｍ【ａ靴扩ｆｆｌ脏Ｃ．１Ａ细胞均为贴附生长。实验方法５均匀的细胞悬液。吹打细胞时要轻柔，以防细胞受到损伤。⑤用玻璃吸管反复轻轻吹打贴壁细胞，使细胞从培养瓶壁上脱离下来，形成养瓶，终止消化。④用移液管吸除消化液，加入适量含１０％胎牛血清的培养液，轻轻转动培质回缩、细胞间隙增大后，终止消化。③在３７。Ｃ温箱消化３．５分钟，放在显微镜下观察细胞消化情况，当细胞胞②加入适量胰蛋白酶液于细胞培养瓶内，以恰好覆盖培养瓶底为限。①将细胞培养瓶内旧培养液倒掉或用玻璃移液管吸掉。２．１．１细胞传代培养包括细胞传代、细胞冻存以及细胞复苏等过程。细胞的生长方式包括悬浮细胞培养所用的试剂、培养瓶、移液管等均要经过严格的消毒灭菌工作。细胞细胞培养需要严格的无菌技术，整个操作过程均在超净工作台进行，另外，细胞培养２．１．注射器、盖玻片、载玻片等。其他：细胞培养瓶、培养皿、细胞计数器、移液管、离心管、烧杯、量简、制造；Ｃｏｕｌｔｅｒ公司ＸＬ／ＸＬ—ＭＣＬ流式细胞分析系统：美国ＢｅｃｋｍａｎＥＰＩＣＳＣｏｕｌｔｅｒＦｉｓｈｅｒ公司制造；ＭＫ３酶标仪：美国ＴｈｅｒｍｏＭｕｌｔｉｓｋａｎＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＴｈｅｒｍｏＢＣＤ．２４３Ｋ新飞无氟电冰箱：由中国河南新飞集团制造；ＤＫ一８Ｄ型电热恒温水槽：由上海精宏实验设备有限公司制造；小型烤箱：由上海新苗医疗器械制造有限公司制造：Ｅｌｅｃｔｒｉｃ公司制造；高压灭菌锅：由日本ＳＡＮＹＯ细胞培养箱：由美国Ｔｈｅｒｍｏ公司制造；公司制造；Ｒ大离心机均由德国ＥｐｐｅｎｄｏｒｆＲ台式４离心机、￥８０４倒置显微镜、￥４１５ＨＳＩＮ超净工作台：由珠海市再鑫仪器有限公司制造：ＴＳＡＲ实验材料与方法

实验材料与方法⑥用移液管将细胞悬液移入离心管中，低速离心（１０００＂、＂１２００ｒ／ｍｉｎ）５ｍｉｎ，弃去上清液，再加入适量培养液洗涤一次，用玻璃管吹打均匀，制成细胞悬液。⑦取ｌｍｌ混匀的细胞悬液，用培养基稀释适当的倍数，细胞计数板计数细胞后，接种于无菌的细胞培养瓶中，加入适量的含１０％胎牛血清的培养基，放在３７℃，５％Ｃ０２培养箱中进行培养。本实验所用细胞一般２＂－＇３ｄ换一次培养液。待细胞铺满器皿底面，即可使用，也可继续传代扩大培养或进行细胞冻存。２．１．２细胞冻存细胞冻存是细胞培养室的常规工作和通用技术，细胞冻存在一１９６℃液氮中，几乎可以储存无限的时间，细胞冻存的原则是缓慢冻存。①选取对数生长期的细胞进行细胞冻存（无支原体污染的细胞），在冻存前一天应给细咆进行换液。②选取对数生长期的细胞制成均匀的细胞悬液，并进行细胞计数，使细胞密度达Ｎ５×１０７／ｍｌ左右，１０００ｒ／ｍｉｎ离心５分钟，倒掉上清液。③将配制好的冻存液（含５０％胎牛血清培养液与二甲基亚砜按９：１比列配制），加入离心管中，加入的冻存液与倒掉的上清液量相同，然后用移液管轻轻吹打使细胞重悬。（注：冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外。）④将制备好的细胞悬液分装于高压灭菌过的无菌冻存管中，每管加１．５ｍｌ悬液。⑤旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，并用无菌封口膜封管，用标记笔做好标记。⑥冻存：也可将装有细胞的冻存管放入一４℃冰箱３０—６０分钟，然后放入－２０℃冰箱中３０—６０分钟，再放入一７０℃冰箱过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。２．１．３细胞复苏①从液氮罐中取出冻存管。②迅速放Ａ３６℃～３７℃水浴，快速摇动，使其急速融化，３０～６０秒内完成。６

实验材料与方法③冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ｍｌ培养液。④低速离一Ｉｌ，（１０００＂－－１２００ｒ／ｍｉｎ）５ｍｉｎ，去上清后再用培养液洗一次。⑤用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。⑥冻存细胞数量要充分，密度应达至ＵｌＯＴ／ｍｌ，在融解后稀释２０倍时，仍能保持５ｘ１０５／ｍｌ数量。２．２ＭＴＴ法测定细胞生长将对数生长期的Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ细胞消化，加入含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液吹打、混匀，进行细胞计数后同时接种于９６孔板，接种密度为５ｘ１０３个／孔，３７℃５％（体积分数）Ｃ０２＇叵温培养箱内孵育２４ｈ，更换无血清ＤＭＥＭ培养基继续孵育２４ｈ使细胞同步化。９６孔培养板中第１列为空白对照组（不加任何试剂），第２列为阴性对照组（／ＬＹ，ｉＩｌｌ，Ｚ，１０。６ｍ０１／Ｌｆ拘雌二醇），第３、４、５、６列分别加入０．１ｐ．ｇ／ｍｌ、０．２嵋／ｍｌ、０．４Ｆｔｇ／ｍｌ、０．８｝＿ｔｇ／ｍｌＰＴＸ，每列设５个平行对照孔，３７℃，５％Ｃ０２恒温培养箱内孵育，分别于加药后２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ终止反应并显色，每孔加入ＭＴＴ染料２０１ｘｌ，３７＂Ｃ孵育４ｈ，弃上清液，每孔加入ＤＭＳＯ２０１１１，混匀，室温放置２０－－－３０ｍｉｎ，酶标仪测定４９０ｎｍ光密度值（ＯＤ）。实验重复３次。２．３流式细胞仪测定子宫内膜癌细胞周期将对数生长期的Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ细胞消化，加入含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液吹打、混匀，接种于２５ｃｍ２细胞培养瓶，密度５ｘ１０５个／瓶，细胞贴壁后更换无血清培养基继续培养２４ｈ，空白对照组不加入任何试剂，阴性对照组ＪＪＨ／Ｘ．１０。６ｍｏｌ／Ｌ的雌二醇，实验组加入１０６ｍｏｌ／Ｌ的雌二醇及不同浓度的ＰＴＸ（０．２、０．４９９／ｍ１），３７℃５％Ｃ０２恒温培养箱内孵育４８ｈ，收集１ｘ１０６个细胞，离心弃上清液，用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）洗涤两遍，立即快速加入．２０℃预冷的７０％冰乙醇２ｍｌ，充分混匀４℃固定过夜。次日离心，倒掉乙醇，ＰＢＳ洗涤两遍，弃上清，加入ＲＮＡ酶至终浓度Ｓ０，ｇ／ｍｌ，３７＂Ｃ水浴消化３０ｍｉｎ，置冰上１５ｍｉｎ终止ＲＮＡ酶作用，加入ＰＩ至终浓度５０Ｉ＿ｔｇ／ｍｌ，４。Ｃ反应３０ｍｉｎ，流式细胞仪检测细胞周期。实验重复３次。７

实验材料与方法２．４ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ流式细胞术检测细胞凋亡将对数生长期的Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ一１Ａ细胞消化，加入含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液吹打、混匀，接种于２５ｃｍ２细胞培养瓶内，密度５×１０５个／瓶，细胞贴壁后更换无血清培养基继续培养２４ｈ，空白对照组不加入任何试剂，阴性对照组加入１０－６ｍｏｌ／Ｌ的１７１３．雌二醇，实验组加入１０曲ｍｏｌ／Ｌ的１７１３．雌二醇及不同浓度的ＰＴＸ（Ｏ．２ｌａｇ／ｍｌ、０．４“ｇ／ｒｒａ、Ｏ．８ｕｇ／ｍ１），３７。Ｃ，５％Ｃ０２恒温培养箱内孵育４８ｈ，按照ＡｎｎｅｘｉｎＶ．ＦＩＴＣ细胞凋亡试剂盒说明书检测细胞凋亡。实验重复３次。具体操作步骤：１．用不含ＥＤＴＡ的胰酶消化收集贴壁细胞，用ＰＢＳ洗涤细胞两次（２０００ｒｐｍ离一１］，５ｍｉｎ）收集ｌ～５×１０５个细胞；２．加入５００１１Ｌ的ＢｉｎｄｉｎｇＢｕｆｆｅｒ悬浮细胞；３．加入５ｕＬＡｎｎｅｘｉｎＶ—ＦＩＴＣ混匀后，再加入５ｕＬＰｒｏｐｉｄｉｕｍＩｏｄｉｄｅ混匀；４．室温、避光反应５～１５ｍｉｎ；５．流式细胞仪检测细胞凋亡；２．５统计学处理应用统计软件ＳＰＳＳ１７．０对实验数据进行分析，结果以均数±标准差表示，方差齐性检验后行重复测量，单因素方差分析，以Ｐ＜Ｏ．０５作为显著性检验标准，实验结果重复３次。８

讨论娃二口１里木ＭＴＴ实验结果１７１３．雌二醇对Ｉｓｈｉｋａｗａ、ＨＥＣ．１Ａ细胞增殖的影响子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞在４９０ｎｍ处光密度值增大，１７Ｂ一雌二醇对Ｉｓｈｉｋａｗａ１．１细胞具有促增殖作用，呈时间依赖性和浓度依赖性；而对ＨＥＣ．１Ａ细胞促增殖作用不显著，各浓度之间差异均无统计学意义。虽然从光密度值来看，随着浓度增加，０Ｄ４‰值增加，但除了０Ｍ与１０４Ｍ之间差异有显著性意义外（Ｐ≤０．０５），其余各浓度间差异均无显著性意义。结果见表１，图１．１，图１．２依据表１选择最佳浓度为１０。６ｍｏｌ／Ｌ，进行后续实验。表１Ｅ２对子宫内膜癌细胞的增殖作用（ＯＤ４９０ｍ，均数±标准差）００．７９９０－士ｏ．００７３０．８９９２－＋０．０２０４０．９９３４：Ｌ－０．０４０７Ｏ．９８２０士ｏ．０６５０１．００９８土ｏ．０２印１．０２４锄．０３６８１．０１９６士０．１１２２１．０３９６士０．１０４０１０。１００．８０５０－士－０．０５３８０．９１５２－＋０．０３５７１．００９６ｉＯ．０６０９Ｏ．９９９４士０．０６８９１０｛０．９５０１：Ｌ－０．０５９５１０击１．０００１士－０．０７８２１．０５０１：ｔ－０．０１０１１．１９１８－４－０．０７４９１．１５１８－＋－０．０７５９１．０３９６士０．１０７６１．０４０２士０．０９６６１．０４０２．士ｏ．１１２６１．０３４８－４０．１３８３１．０５４４：ｔ－０．１４３ｌ１．０６５０－１０．１３６２１．０８０４：Ｌ－０．１４５８１．３０１０－ｉ－０．０１１０１．３９９２－士０．０１１３１０４１．１５０２－４－０．ＯＩ１８１．２９６８－士－０．００８６１．０８４黜曲．０６６３１．１０９８．－４－０．０７４３注：在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，不同时间对Ｅ２促细胞增殖的影响的差异有显著性意义（Ｆ＝２１２．１３２，Ｐ＜０．００１），在０Ｍ、１０～ｏＭ、１０一Ｍ、１０石Ｍ和１０。４Ｍ５种浓度间，除了０Ｍ和１０‘１０Ｍ之间促细胞增殖作用差异无显著性意义外（Ｐ＝０．５４３），其余各浓度间差异均有显著性意义（Ｐ＜０．００１）；在ＨＥＣ．１Ａ细胞，不同时间对Ｅ２促细胞增殖的影响的差异无显著性薏交彳Ｆ＝ｏ．９５５，Ｐ＝０．３９３），在０Ｍ、１０一ＯＭ、１０一Ｍ、１０缶Ｍ和１０４Ｍ５种浓度间，除了０Ｍ和１０４Ｍ之间促细胞增殖作用差异有显著性意义外（Ｐ＝ｏ．０２３），其余各浓度间差异均无显著性意义。／尸纷侔、万历固ｆ

Ｅ２对Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞促增殖作用图１．１ＴＩ娅讨论有显著性意义（Ｐ＜０．００１）。见表２，图２．１和图２．２显著性意义（Ｐ＜ｏ．００１）；在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，各浓度间抑制细胞增殖作用差异均间抑制细胞增殖作用差异无显著性意义外（Ｐ－ｏ．２０８），其余各浓度间差异均有５种浓度间，在ＨＥＣ一１Ａ细胞，除了Ｏｐｇ／ｍｌ和０．１ｐｇ／ｒｍ之０．４Ｉ．ｔｇ／ｍｌ、０．８ｒｔｅｄｍｌ制作用均有时间依赖性和浓度依赖性特点。在０ｐ鲈１１ｌ、０．１ｌ叫ｍｌ、０．２“ｇ／ｍｌ、Ｅ２作用下，ＰＴＸ对Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ细胞的增殖抑在相同浓度１０＂６ｍｏｌ／ＬＰＴＸ对Ｅ２促子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用１．２Ｅ２对ＨＥＣ－ＩＡ细胞的作用图１．２ＯｎｉｃｏｎａｅｎｔｒａｔＥ２２４ｈ１０７２ｈ４８ｈ—ｃｏｎｔｒｏｌ■１０一Ｉｑ一１０一ｑ－１０一ｑ毽１０一ｑｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＥ２ＴＩＭＥ２４ｈ■ｃｏｎｔｒｏｌ一１０—１呵●１０一ｑ一１旷ｑ镌１０一●Ｉ

Ｏ．洲士ｏ．０２９３０．“啦Ｏ．０５３６０．３９赃０．０５３８５种浓度间，其抑制细胞增殖作用差异均有显著性意义（Ｆ－４９５．４３７，异有显著性意义（Ｆ＝４７．４２８，Ｐ＜０．００１），在０ｒｔｇ／ｍｌ、０．１Ｉ＿ｔｇ／ｍｌ、０＆ｔｇ／ｍｌ、０．４Ｉ－ｔｇ／ｍｉ、Ｐ＜０．００１）；在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，不同时间ＰＴＸ对Ｅ２促细胞增殖的抑制作用的差著性意义外（Ｐ＝０．２０８），其余各浓度间差异均有显著性意义（Ｆ＝４２４．５６１，显著性意义（Ｆ＝１２３．３９５，Ｐ＜０．００１），在０Ｉ．ｔｇ／ｍｌ、０．１９９／ｍｌ、０．２９９／ｍｌ、０．４９９／ｍｌ、注：在ＨＥＣ．１Ａ细胞，不同时间ＰＴＸ对Ｅ２促细胞增殖抑制影响的差异有Ｏ．９９８０士ｏ．０３１０７２ｈ４８ｈ７２ｈ４８ｈ２４ｈ（腭·ｍｌ。）既Ｃ．１ＡＩｓｈｉｋａｗａＰＴｘ／Ｅ２作用下ＰＴＸ对子宫内膜癌细胞增殖的影响（ＯＤ４９０ｎｍ，均数±标准差）１０击ｍｏｌ／Ｌ表２讨论０８Ｉ０．０５０肚Ｏ．０３５０Ｏ．０５７２士ｏ．ＯｌＯ．８０．１４９０－ｔ０．０２４ｌ０．３０ｌＯ士ｏ．０５２００．１９９８ｉ－０．０２４ｌ０．３０ｌＯ士ｏ．０３８６０．４Ｏ．０５０３：ｔＯ．０３６１０．５９９０－士－０．０３８６０．６９８８－４０．０５８４０．３９８０－Ｉ－０．０１７４０．４９６０－＆－０．０３２９０．５９７吐ｑ）．０６４８０．２０．７０ｌＯ士ｏ．０４３４０．８５４０士ｏ．０６０４１．００１０１０．０７８８０．６９００士０．０４０５Ｏ．７８８２士ｏ．０６９７０．８９４０士０．０９４６０．１１．０３９趾ｏ．０６９１１．０８００士０．０９２０１．０５５０士ｏ．０４１４１．１９９８士０．０３９７１．１４８（Ｋ－０．０６２９Ｅ２捌激！ｓｈｉｋａｗａ细庭增殖的抑制作用围２．１不同浓度ＰＴｘ对１０－ｓＭＰ＜０．００１）。０．８｝ｔｇ／ｍｌ５种浓度间，除了０Ｉ＿ｔｇ／ｍｌ和０．１９９／ｍｌ之间抑制细胞增殖作用差异无显０．８Ｉ．ｔｇ／ｍｌ０．０６９０－ａ：０．０３７７０．０８０∞曲．０３３５．０９９０士－０．０２３４

Ｅ２浓度增加，Ｇ棚ｌ期比例下降（Ｆ＝３４．０７８，Ｐ＝０．００１），Ｓ期比例升高（Ｆ＝在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，Ｅ２对细胞周期Ｇ棚ｌ期、Ｓ期作用有浓度依赖性，随着不同浓度Ｅ２对细胞周期的作用差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。表３不同浓度Ｅ２作用于两种细胞４８ｈ细胞周期分布情况（均数±标准差）在ＨＥＣ一１Ａ细胞，不同浓度Ｅ２对细胞周期的作用差异均无统计学意义。见表３。Ｅ２浓度增加，Ｇｏ－－Ｇｌ期比例下降，Ｓ期比例升高，Ｇ２－Ｍ期差异无统计学意义；Ｅ２对子宫内膜癌细胞周期分布的影响２细胞周期的变化ＴＩ娅ｃｏｎｔｒｏｌ—ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉＯｎＰＴＸ讨论Ｑｏ∞二∞ｏ墨∞罩一∞≯＾盘ＨＧｏ⑦叫ｖ１２Ｐ＝０．００２），Ｇ２－Ｍ期差异无统计学意义（Ｆ＝Ｏ．２４５，Ｐ＝０．７９０）；在ＨＥＣ．１Ａ细胞，注：在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，Ｅ２对细胞周期Ｇｏ￣Ｇｌ期、Ｓ期作用有浓度依赖性，随着２．１Ｅ２刺激耻ｃ一１Ａ细疆增殖的影唷图２．２不同浓度Ｐ狱对ｌＯ－６Ｍ麓０．８ｕｇ／ｍｌ一０．４ｕｇ／ｍｌ●０．２ｕｇ／ｍｌ臻０．１ｕｇ／ｍｌ

胞，ＰＴＸ对细胞周期Ｇ椰ｌ（Ｆ：６．８０９，Ｐ＝０．０２９）、Ｓ期（Ｆ＝２２．２６６，Ｐ＝０．阔作用的差异有浓度依赖性，对Ｇ２－Ｍ期（Ｆ＝０．１４２，Ｐ＝０．８７０）无浓度依赖性．性，对Ｓ期作用的差异则无统计学意义（Ｆ－－１．６６５，Ｐ＝０．２６６）；在ＨＥＣ一１Ａ细（Ｆ＝２１．０２８，Ｐ＝０．００２）、Ｇ２－Ｍ期（Ｆ＝３５．５３３，Ｐ＜０．００１）的作用均有浓度依赖Ｅ２作用下，在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，ＰＴＸ对细胞周期Ｇｏ～Ｇ，注：在相同浓度１０石ｍｏＦＬ表４不同浓度ＰＴＸ作用于两种细胞４８ｈ细胞周期分布情况的差异无统计学意义。见表４，细胞，ＰＴＸ对细胞周期Ｇｏ－－Ｇｌ、Ｓ期作用的差异有浓度依赖性，对Ｇ２－Ｍ期作用Ｇ２－Ｍ期的作用均有浓度依赖性，对Ｓ期作用的差异则无统计学意义；在ＨＥＣ－１ＡＥ２作用下，在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，ＰＴＸ对细胞周期Ｇｏ－－Ｇ１、在相同浓度１０石ｍｏｌ／ＬＰＴＸ对子宫内膜癌细胞周期分布的影响２．２讨论。ｓＩ图３．１Ｅ，作ｍｇｔｔ空白对照组ｋａｗａ细胞周期分布图ｈ。心乞。≯”“８。。：孙。？”““‘鼬矗

｛｛ｌ童空白对照组１４ＨＥＣ一１Ｅ，作用组ＰＩＸ作用组ＤＭＣｏｎｔｅｎｔ．…。雀３细胞凋亡检测结果讨论凋亡逐渐增加。赖性（Ｆ＝２７．２９４，Ｐ＜０．００１；Ｆ＝８２．０６９，Ｐ＜０．００１），随着ＰＴＸ浓度增加，细胞表５不同浓度ＰＴＸ作用于Ｉｓｈｉｋａｗａ、ＨＥＣ．１Ａ细胞４８ｈ后的凋亡情况（％）渐增加。见表５，图４．１，图４．２。（Ｆ＝２７．２９４，Ｐ＜０．００１；Ｆ＝８２．０６９，Ｐ＜０．００１），随着ＰＴＸ浓度增加，细胞凋亡逐ＰＴＸ对子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ、ＨＥＣ．１Ａ细胞的促凋亡作用均具有浓度依赖性Ａ细胞周期分布图图３．２

蘸瓣壤瓣黪麓，霪鬻≥黔蘩ｊ．毒：参ｉ辫子‰醚池？ｊ０囊．－．■ｊ滠１瓤。．辫；誉辫。≤●豢。＋。．：。纛瑟≯＿－８．船‘）ｊ，．·：．簿≥Ｉ。－－．“Ｂ１砭讨论１翌３３１．瞒麓ｊ：≯。ｋｉｓｈ图４．１不同浓度ＰＴＸ对ＩＰＴｘ作用组０．４ｕｇ／ｍ王ＰＴｘ作用组ｎｊｔ５ｊ－１Ｘ｝２‰＋譬笋誓ｉ：ｉ；掩ｉ．．寥黔‘．“一－ｈｊ●…１ｓＡ细胞凋亡的影响图４．２不同浓度ＰＴＸ对ＨＥＣ－１ＰＴｘ作用组０．４ｕｇ／ｍｌＰＴｘ作用组阴性对照组０．２ｕｇ／ｍｌ７．３，‘７％．３Ｘａｗａ细胞凋亡的影响．·

讨论１６对其ｃＤＮＡ通过聚合酶链反应扩增，得到的产物和使ＧＰＲｌ寡核苷酸探针克隆经过分析该蛋白分子的核酸和氨基酸序列，发现它和ＧＰＣＲｓ具有一定的同源性，框架（ＯＲＦ），该框架长１１２８ｂｐ，可编码一个含有３７５个氨基酸的蛋白质分子；端一长５０４ｂｐ的非编码区；３’端一长９７２ｂｐ的非编码区；和一个开放阅读框的染色体７ｐ２２，具有典型的七次跨膜结构特征，ｃＤＮＡ序列全长２６０４ｂｐ，包括５’ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＥＲ）。ＧＰＥＲ蛋白是Ｇ蛋白偶联受体家族成员之一，其基因定位于ｅｓｔｒｏｇｅｎｃｏｕｐｌｅｄｐｒｏｔｅｉｎ转录效应”，又被命名为Ｇ蛋白偶联雌激素受体（（Ｇ命名为Ｇ蛋白偶联受体３０（ＧＰＲ３０），因为后来研究发现其参与了雌激素的“非似物ＧＰＣＲ－Ｂｒ的ｃＤＮＡ，经过基因库检验证实它是一种新的Ｇ蛋白受体，曾被时Ｃａｒｍｅｃｉ等人【１９１从人乳腺癌细胞株ＭＣＦ．７中分离出一种Ｇ蛋白偶联受体的类ＧＰＥＲ是一种新型Ｇ蛋白偶联受体，在２０世纪９０年代末首次被发现，当干细胞的增殖效果。ＧＩ—ＲＡＳ－ＲＡＦ．ＭＡＰＫ信号转导通路，来抑制溶血磷脂酸（ＬＡＰ）对大鼠胚胎神经８】研究表明：百日咳毒素（ＰＴＸ）能经过阻断一个决定性步骤。崔慧琳等【１促进肝实质细胞植入，并阻断趋化因子受体信号转导，是初期免疫系统活化的通透性，在细胞移植前，百日咳毒素阻断Ｇ蛋白在肝脏内皮细胞的通路，高效及作为肌动蛋白细胞骨架重组的可逆诱导剂，阻断体外细胞融合，且提高血管１１７］：将百日咳毒素灌注到小鼠门静脉系统血管内，阻断内皮细胞的Ｇ蛋白通路，度升高，从而导致百日咳毒素（ＰＴＸ）的许多生物活性效应【ｌ孓１６ｊ。有关研究表明腺苷酸环化酶（ＡＣ）活性发生不可逆的作用，细胞内环腺苷酸（ｃＡＭＰ）的浓体结合，让百日咳毒素接近靶细胞，在穿过细胞膜后，和靶ＧＴＰ结合，结果使二聚体、Ｓ３．Ｓ４二聚体与一个Ｓ５连接器构成的五聚体，其功能是通过与细胞受蛋白的Ｑ亚基不能活化，从而抑制Ｇ蛋白介导的相关通路［１３－１４］ｏＢ寡聚体由Ｓ２．Ｓ４蛋白的位亚基ＡＤＰ－核糖基化，降低ＧＴＰ与Ｇ蛋白伍亚基的结合水平，导致Ｇ是单一多肽，称作Ｓ１亚单位，具有腺苷二磷酸核糖基转移酶的活性，能催化Ｇ物，由一个酶活性Ａ原体及一个Ｂ寡聚物组成的原生型Ａ．Ｂ结构毒素。Ａ原体百日咳毒素（ＰｒＤ（）是一种由外膜蛋白为主要成分的百日咳杆菌的毒性复合１．百日咳毒素简介及ＧＰＥＲ概论讨论

】７的Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞中和ＥＲ低表达的ＨＥＣ．１Ａ细胞中均有表达。关于ＧＰＥＲ的配题组前期研究结果也证明ＧＰＥＲ在子宫内膜癌细胞胞浆中表达，且在ＥＲ高表达研究者认为ＧＰＥＲ的亚细胞定位主要在细胞器内质网，而不是细胞膜上。本课这可能和ＧＰＥＲ的功能状态及机体组织、细胞表达ＧＰＥＲ的情况有关，但多数构上，可能是粗面内质网。到目前为止，对ＧＰＥＲ亚细胞定位仍无确切的结论，Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞质内阳性表达率明显高于细胞膜，其亚细胞定位于细胞内管网状结到细胞膜上有ＧＰＥＲ表达。近期国内一项研究发现【２６】：ＧＰＥＲ蛋白在子宫内膜癌在神经元的高尔基体上，同时在内质网中也观察到有ＧＰＥＲ的表达，但未观察位于细胞器内质网上。Ｍａｔｓｕｄａ等【２５Ｊ应用标记的细胞器，观察到ＧＰＥＲ主要定位进行定位，结果发现在上述转染细胞中ＧＰＥＲ均表达与于内质网，即ＧＰＥＲ定染ＧＰＥＲ的乳腺癌细胞系ＭＤＡ－ＭＢ２３１，ＨＥＫ２９３和子宫内膜癌细胞系ＨＥＣ５０等１２４］在进行ＧＰＥＲ蛋白的亚细胞定位研究时，采用免疫荧光双重标记法，对转是否与标记区域相重叠，结果发现ＧＰＥＲ蛋白主要定位于细胞器内质网。Ｏｔｔｏ内质网，高尔基体和肌动蛋白等进行标记，然后观察有ＧＰＥＲ蛋白表达的区域结构上，为进一步精确定位其亚细胞位点，在细胞内的骨架结构上，如线粒体，下对ＧＰＥＲ的亚细胞进行定位观察，结果发现ＧＰＥＲ出现在细胞内管状的网络时，应用绿色荧光对ＣＯＳ．７细胞表达的ＧＰＥＲ进行标记，在共聚焦荧光显微镜２３Ｊ对ＧＰＥＲ的亚细胞定位进行研究们多认为在细胞膜上，近来Ｒｅｖａｎｋａｒ等人１２Ｌ表达与ＡＫＴ的活化呈正相关。关于ＧＰＥＲ的亚细胞定位尚无定论，最初，学者且其表达多见于分化较差、侵肌深和临床分期晚子宫内膜癌中，并证实ＧＰＥＲ研究表明【５溜’２２１，ＧＰＥＲ在非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中均有高表达，甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌中均有ＧＰＥＲ蛋白的过度表达。既往及胎盘等组织细胞中皆有表达ｆ７１。许多研究还证实在恶性肿瘤细胞中，如未分化素分布的靶组织中表达量较高，现在已证实在前列腺，乳腺，心，子宫，卵巢，组织中，比如脑组织，心脏，肝脏，肾脏，肺，前列腺及胎盘等中，且在雌激个保守的序列，可能在细胞信号转导的过程中发挥作用。ＧＰＥＲ广泛分布于机体（Ａｓｐ）．精氨酸（Ａｒｐ）一酪氨酸（Ｔｙｒ）．三联体（ＤＲＹ），该结构是ＧＰＣＲｓ的一胱氨酸残基分别位于第一和第二个细胞外袢，此外，还包含一个天冬氨酸基袢【２１１。ＧＰＥＲ蛋白在细胞外具有３个Ｎ．糖基化位点，其中有两个高度保守的半区，包括由２０至２６个氨基酸构成的６个细胞内和细胞外循环交替的细胞内外得到的产物相比较，结果是它们具有相似性１２０ｌ；ＧＰＥＲ蛋白具有７个疏水性跨膜讨论

．雌二醇、孕酮、睾酮、皮质醇等无结合力。ＲｃｖａｎｋａｒＱ１３一Ｅ２）具有很强的结合能力，但与雌酮、雌三醇结合能力非常低，与１７（１７１３一雌二醇还发现ＧＰＥＲ与各类激素结合的能力差异性较大，如ＧＰＥＲ蛋白和１７进行干扰后，人类胚胎肾细胞便失去了与雌激素结合的能力；后来Ｔｈｏｍａｓ等人胎肾细胞就拥有了与雌激素结合的能力，应用ＧＰＥＲ干扰物质对ＧＰＥＲ的表达（ＧＰＥＲ蛋白与ＥＲ均阴性表达），导入转染ＧＰＥＲ的ｃＤＮＡ分子后，发现人胚ＥＲ阴性表达），细胞膜与雌激素有很强的结合能力；而在人类胚胎肾细胞中Ｔｈｏｍａｓ等【８Ｊ研究发现，在人乳腺癌细胞系ＳＫＢＲ３中（ＧＰＥＲ蛋白阳性表达而至目前研究阶段，很多研究证明ＧＰＥＲ具有与雌激素结合的所有结构特征，如亲和力，Ｇ－１与（｝ＰＥＲ结合后可使后者激活，进而引起ＧＰＥＲ发挥其生物学功能。模拟和分子生物学筛选方法发现了ＧＰＥＲ的特异性配体为Ｇ－１，两者具有很强的体，最早认为是肽类或糖蛋白，随后的研究否定这一说法。Ｂｏｌｏｇａ等［２７１，使用讨论１８的重要方式，多种生长因子，细胞因子和许多致癌物质通过各种途径使ＭＡＰＫ括以下四种途径：１．ＥＲＫ－ＭＡＰＫ途径：这种途径是雌激素完成细胞内信号转导激活和上调原癌基因ｃ．１０ｓ表达来实现。总结既往研究成果，其作用机制主要包Ｍａｐｋｓ，Ａｋｔ，Ｓｒｃ等家族成员，蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ），蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）等的生长因子受体（ＥＧＦＲ），胰岛素样生长因子受体（ＩＧＦＲ）等，脂激酶，如Ｐ１３Ｋ，自身磷酸化激活受体酪氨酸激酶，如血小板源生生长因子受体（ＰＧＦＲ），表皮雌激素结合介导的快速生物学效应主要是通过释放Ｃａ２＋、ｃＡＭＰ、ＮＯ等物质，胞与甲状腺癌细胞增殖，减少癌细胞凋亡，与肿瘤发生发展密切相关。ＧＰＥＲ与现：雌激素及他莫昔芬（ＯＨＴ）与ＧＰＥＲ蛋白结合后，均能促进子宫内膜癌细细胞周期蛋白Ｄ的表达上调，同时抑制氧化应激导致的细胞凋亡。另有研究发应【１１１。Ｋａｎｄａ掣１０１研究表明：雌激素和ＧＰＥＲ结合，可引起抗凋亡蛋白Ｂｃｌ．２与在几秒至几分钟内迅速完成细胞内信号传导，介导雌激素的快速促细胞增殖效Ｂ．Ｅ２）和ＧＰＥＲ蛋白结合，激活细胞内第二信使，１３一雌二醇（１７要的作用，１７ＧＰＥＲ主要通过介导调节细胞的增殖分化，在细胞增殖凋亡过程中发挥着重２．ＧＰＥＲ生物学效应及其作用机制且二者都是ＧＰＥＲ的激动剂。亦能与１Ｃ１１８２７８０（纯抗雌激素药物）和ＯＨＴ（对抗雌激素药物他莫昔芬）结合，ＣＭ等人团Ｊ研究发现，ＧＰＥＲ

膜表面的间质金属蛋白酶（啪），后者促使肝素结合】９要作用，而且还能独立介导雌激素的多种生理功能，在心血管、神经内分泌系随着对ＧＰＥＲ的深入研究，发现ＧＰＥＲ不仅在肿瘤的发生发展中发挥着重提供可能的新靶点。介导的促细胞增殖作用，进而抑制肿瘤细胞的增殖，促使其凋亡，为治疗肿瘤并介导了细胞增殖、分化过程。因此抑制ＧＰＥＲ在细胞内的表达，从而阻断ＧＰＥＲ引发一系列生物学效应，最终促进细胞生长增殖。以上研究均表明，ＧＰＥＲ参与发生核内聚，引起一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）丝氨酸磷酸化，ＮＯ释放增加，进而聚集，接着抗凋亡和促进细胞增殖的激酶ＡＫＴ移至膜磷脂被活化，活化的ＡＫＴ活磷脂酰肌醇激酶（Ｐ１３Ｋ），从而导致三磷酸磷脂酰肌醇（ＰＩＰ３）在细胞膜表面信号传导途径。该信号途径活化过程大致如下：雌激素与ＧＰＥＲ结合后快速激Ｐ１３Ｋ－ＡＫＴ－ＮＯ途径现已经证实，雌激素与ＧＰＥＲ结合后亦可激活Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ传导机制及发挥的生物学效应尚不太清楚，有待研究者们的进一步研究。４．起ｃＡＭＰ水平增高可抑制ＭＡＰＫ的活性。目前ＧＰＥＲ蛋白经该途径介导的信号的激活，证明了该途径是存在的。但也有研究发现，雌激素与ＧＰＥＲ结合后引应。蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）抑制剂与ＡＣ抑制剂均可抑制ＡＣ－ｅＡＭＰ—ＰＫＡ－ＭＡＰＫ途径途径的级联反应，激活细胞内复杂的信号传导途径，进而引起一系列生物学效ＧＰＥＲ激活腺苷酸环化酶（ＡＣ）引起细胞内第二信使ｃＡ＿ＩＶＩＰ水平升高，引发ＰＫＡ瘤细胞生长增殖及细胞周期进展。３．ＡＣ．ｃＡＭＰ—ＰＫＡ—ＭＡＰＫ途径雌激素通过分裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ），同时活化细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ），促进肿释放，接着ＨＢ—ＥＧＦ反式激活ＥＧＦＲ蛋白，并激活其下游信号传导通路分子促激活Ｓｒｅ家族酪氨酸激酶，使与其相连的蛋白酪氨酸残基磷酸化，进而活化细胞ｒ二聚体制为：ＧＰＥＲ蛋白与雌激素结合后，先是Ｇ蛋白三聚体解离，继而Ｇ１３合后通过活化表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）传导途径发挥其非转录效应。具体机细胞生长周期。２．ＥＧＦＲ－ＥＲＫ途径既往多项研究发现，雌激素与ＧＰＥＲ蛋白结化，磷酸化的ＭＡＰＫ转移到细胞核，通过转录调节方式，促进细胞增殖，延长ＭＥＫ级联反应，迅速激活细胞外信号调节激酶（ＥＲＫｌ／２），从而使ＭＡＰＫ磷酸激素与ＧＰＥＲ结合后激活苏氨酸，酪氨酸双位点，经由下游分子Ｓｒｃ，Ｒａｓ，Ｒａｆｌｐ相关，ＭＡＰＫ可能在肿瘤细胞的恶性行为过程中发挥了重要的作用。此外。雌和分化。有研究发现细胞的恶性转化和肿瘤的转移扩散与ＭＡＰＫ异常表达密切磷酸化激活，磷酸化的ＭＡＰＫ将细胞浆内信号传入细胞核内，参与细胞的增殖讨论

（０ＨＴ）可通过诱导子宫内膜癌细胞株Ｉｓｈｍａｗ柳Ｉ也Ｃ．１Ａ中原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达，腺苷（ｃＡＭＰ），环磷酸鸟苷（ｃＧⅧ）和钙离子的含量，以促进骨细胞生长。２０加快子宫内膜癌细胞的生长，给上述两种细胞转染ＧＰＥＲ反义寡核苷酸后，Ｅ２和Ｐ１３Ｋ．ＡＫＴ．ＮＯ四种途径。Ｖｉｖａｃｑｕａ等ｔ１１Ｊ研究者们发现，Ｅ２和４．羟基他莫昔芬括ＥＲＫ．ＭＡＲＫ途径、ＥＧＦＲ－ＥＲＫ途径、ＡＣ．ｃＡ］Ｖ［Ｐ．ＰＫＡ．ＭＡＰＫ途径、多项研究已证实：雌激素与ＧＰＥＲ结合后可激活细胞内多种信号转导途，主要包表达相一致，子宫内膜上雌激素受体异常表达与内膜癌的发生密切相关。既往胞中雌激素受体表达量最高，且体内雌激素水平高低与子宫内膜上雌激素受体在女性生殖器官中，子宫内膜对雌激素的反应最强，因为子宫内膜组织细３．ＧＰＥＲ蛋白与子宫内膜癌的关系成３磷酸肌醇（Ｐ１３Ｋ）和甘油二酯，也可增加机体内初级成骨细胞中的环磷酸通过对ＰＴＸ敏感的Ｇ蛋白引起钙离子快速内流，使细胞内钙离子增加，进而合活核转录因子ＮＦ－ｋＢ，启动基因表达，最终促进新骨细胞生成。雌激素还可以雌激素通过快速活化成骨细胞中的白介素．６与白介素．１等细胞因子，进一步激在青春期能调节骨骼纵向生长，另外，ＧＰＥＲ可介导改善骨质疏松的非转录效应，统中，雌激素和ＧＰＥＲ结合激活信号转导通路后对骨组织的功能有调节作用，细胞内钙离子动员，通过调节细胞内钙离子的浓度而发挥其作用【２３Ｊ。在骨骼系Ｂ（Ａｋｔ）和细胞外信号调节激酶（ＥＩⅨ１／２），并最终导致转录因子表达，促进分裂素激活蛋白激酶（ＭＡＰＫＳ），磷酸肌醇３激酶（Ｐ１３Ｋ），进而活化蛋白激酶促使表皮生长因子释放，扭转激活表皮生长因子受体，触发下游事件，如活化（ＳｐｈＫ），使过氧化物的产生减少，并可直接清除超氧阴离子【２引，同时，此过程蛋白异三聚体，通过快速信号传导通路激活环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、鞘氨醇激酶心肌细胞，平滑肌细胞和内皮细胞等均有分布，雌激素与ＧＰＥＲ结合后可活化Ｇ经元活动、基因转录及对神经保护作用起关键作用。在心血管系统中，ＧＰＥＲ在磷酸化，而ＭＡＰＫ激活可以对神经元及大脑活动有潜在调节作用，同时可对神分布，生理剂量的雌激素与ＧＰＥＲ结合后通过快速信号传导通路使ＭＡＰＫ迅速统、骨骼组织等方面起保护作用。有研究显示，ＧＰＥＲ在中枢神经系统中有广泛讨论

胞增殖的能力。另有研究表明，三氧苯胺（ｎ蝴）受体拮抗剂可以阻断依赖ＥＲ统上皮细胞增殖，所以，三氧苯胺（ｎ蝴）治疗乳腺癌能够增加子宫内膜癌的与了这种效应的发生过程。三氧苯胺（删）是临床上乳２】１３．Ｅ２浓度的升高，１３．Ｅ２作用于子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ、ＨＥＣ．１Ａ细胞，随着１７度的１７与内膜癌组织分化程度、ＦＩＧＯ分期相关。本课题组前期研究发现【１２】：将不同浓达显著高于Ｉ期的子宫内膜癌，说明ＧＰＥＲ蛋白在癌组织中呈高表达，且表达程度织中的表达率显著高于高分化的内膜癌组织，ＦＩＧＯＩＩ．ＩＩＩ期组织中ＧＰＥＲ蛋白的表症中阳性表达率均明显高于增生期子宫内膜组织，并且在中、低分化内膜癌组后关系进行研究，结果发现，ＧＰＥＲ蛋白在子宫内膜癌组织以及在子宫内膜增殖曾对不同类型子宫内膜组织中ＧＰＥＲ蛋白的表达情况及其与临床病理分期和预组的癌组织分化较差，常伴有深肌层浸润，低分化和预后不良等。郭瑞霞等１２２１过量表达组的生存率较适度表达组生存率明显降低，由此推断，ＧＰＥＲ过量表达有研究发现在ＧＰＥＲＳ过量表达组雌孕激素受体表达出现下调的现象，并且ＧＰＥＲ激素受体（ＰＲ）表达呈负相关，和雌激素受体（ＥＲ）表达无显著相关性。另外雌激素受体（ＧＰＥＲ）表达和表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达呈正相关，和孕ｃ．ｆｏｓ活化，进而抑制细胞增殖。Ｓｍｉｔｈ等研究发现子宫内膜癌组织中Ｇ蛋白偶联ＧＰＥＲ介导的信号转导通路，如ＥＧＦＲ，Ｐ１３Ｋ和ＭＡＰＫ通路，即可阻断原癌基因影响细胞增殖效果；而加入（｝ＰＥＲ阻断剂如ＧＰＥＲ特异性反义寡核苷酸或阻断Ｑ的信号传导途径，但不能阻断由ＧＰＥＲ介导的原癌基因ｃ－ｆｏｓ的表达，因而不会粒后，羟基他莫昔芬（ＯＨＴ）促原癌基因ｃ—ｆｏｓ表达的效应消失，即失去诱导细转导通路发挥生物学作用，不依赖于ＥＲⅡ表达；在转染ＧＰＥＲ反义寡聚核苷酸质能直接提高原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达，该效应主要是经过ＧＰＥＲ活化ＡＫＴ，ＥＲＫｌ信号细胞研究证明，在子宫内膜癌细胞株Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ中，羟基他莫昔芬（ＯＨＴ）Ｑ作为一个独立因子的组织中起到一定的作用【２９’３０１。Ｖｉｖａｃｑｕａｌｌｌ】在进行体外培养ａ激动剂，在ＥＲ发病率。三氧苯胺的活性代谢产物羟基他莫昔芬（ＯＨＴ）是ＥＲ但研究结果表明，长期应用雌激素或三氧苯胺（ＴＡＭ）能够加快女性的生殖系４．羟基他莫昔芬（ＯＨＴ）迅速诱导原癌基因ｃ—ｆｏｓ表达的能力消失，表明ＧＰＥＲ参讨论

内膜癌的发病规律有重要意义，有可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。ＧＰＥＲ介导的信号传导通路实现的；阻断ＧＰＥＲ介导的信号传导通路对揭示子宫过程；ＰＴＸ抑制子宫内膜癌细胞增殖，促使其凋亡的作用极可能是通过阻断综上所述，ＧＰＥＲ参与了雌激素促子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ、ＨＥＣ．１Ａ细胞增殖Ｂ．Ｅ２）结合引起的促细胞增殖作用，促使其发生凋亡，阻滞细胞周期进展。各浓度问差异无统计学意义。本实验研究表明，ＰＴＸ可抑制ＧＰＥＲ与雌激素（１７期Ｓ期作用的差异具有浓度依赖性，使Ｓ期比例下降，对Ｇ２．Ｍ期作用不显著，期作用具有浓度依赖性，使Ｇ２．Ｍ期比例下降；在ＨＥＣ．１Ａ细胞，ＰＴＸ对细胞周细胞ＰＴＸ对细胞周期Ｓ期作用不显著，各浓度间差异无统计学意义，对Ｇ２．ＭＰＴＸ使子宫内膜癌细胞周期Ｇｏ．Ｇｌ期比例增加，并且具有浓度依赖性。在Ｉｓｈｉｋａｗａ激素促细胞增殖作用，同时可使细胞凋亡数量增加。细胞周期分析结果显示，（２）在子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ一１Ａ细胞，ＧＰＥＲ抑制剂ＰＴＸ可抑制雌的作用未表现出明显的浓度依赖性和时间依赖性的特点。ｔ３．Ｅ２１３。Ｅ２只能通过非转录效应机制促进细胞增殖，故对１７细胞（ＥＲ阴性），１７通过转录效应和非转录效应共同促进细胞增殖、促使细胞周期进展；在ＨＥＣ一１Ａ１３．Ｅ２依赖性的，其非转录效应是ＥＲ非依赖性的。在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞（ＥＲ阳性），１７１３．Ｅ２的转录效应是ＥＲ异，可能是由于两种细胞内ＥＲ水平不同导致的，因为１７子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞和ＨＥＣ．１Ａ细胞促增殖作用及对细胞周期进展作用的差Ｂ．Ｅ２）对胞促增殖作用不明显，且对细胞周期各期作用均不明显，雌激素（１７细胞具有明显的促增殖作用，Ｇｏ．Ｇｌ期比例下降，Ｓ期比例升高，而对ＨＥＣ．１Ａ细１３一Ｅ２）对Ｉｓｈｉｋａｗａ（１）雌激素（１７治疗子宫内膜癌的可能性。实验结果显示：ＨＥＣ一１Ａ细胞增殖凋亡和细胞周期的影响，初步探讨阻断ＧＰＥＲ介导的信号通路１３．Ｅ２）作用下子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ和ｔｏｘｉｎ，ＰＴＸ）对雌激素（１７毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ胞的增殖及凋亡有何影响有待进一步研究。本实验通过观察ＧＰＥＲ抑制剂百日咳发挥着重大作用，但抑制子宫内膜癌细胞中ＧＰＥＲ蛋白的表达，对子宫内膜癌细ＧＰＥＲ和Ｐ．ＡＫＴ表达逐渐增加。以上研究结果表明ＧＰＥＲ在子宫内膜癌发生过程讨论

Ｊ＾三天１３－Ｅ２的作用未表现出明显的浓度依赖性和时间依赖性的九＼对｜Ｂ—Ｅ２）对子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞和ＨＥＣ．１Ａ细胞促增殖作用及ｆ／雌激素（１７结论结论１｝细ｆｌＢ．Ｅ２的转录效应是ＥＲ依赖性的，其非转录效应是Ｅ刈乍依赖性的。在Ｉｓｈｉｋａｗａ促ｐｅ１３一Ｅ２只能通过非转录效应机制Ｊ细胞周期进展；在ＨＥＣ一１Ａ细胞（ＥＲ阴性），１７ｆ叫／Ｂ－Ｅ２通过转录效应和非转录效应共同促进细胞增殖、促使Ｊ内Ｊ胞增殖作用，促使其发生凋亡，抑制细胞周期进展；ＧＰＥＲ参与了雌激素促子宫ｌＧＰＥＲ抑制剂Ｐ１ｘ可抑制雌激素对子宫内膜癌Ｉｓｂｉｋａ、硼、ＨＥＣ．１Ａ细胞的促细Ｉ厂伙。特点。疗子宫内膜癌的新靶点。介导的信号传导通路对揭示子宫内膜癌的发病规律有重要意义，有可能成为制其凋亡的作用极可能是通过阻断ＧＰＥＲ介导的信号传导通路实现的；阻断ＧＰＥＲ／７进细胞增殖，故对１７胞（ＥＲ阳性），１７膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ、ＨＥＣ．１Ａ细胞增殖过程；ＰＴＸ抑制子宫内膜癌细胞增殖，促使』细胞周期进展作用的差异，可能是由于两种细胞内Ｅ脉平不同导致的，

参考文献ｒ．Ｖｈ－ｕｌｅｎｃｅａｆｏｒＬＭ。ＧＰＲ３０／ＧＰＥＲｌ：ＳｅａｒｃｈｉｎｇＢ，Ｌｅｅｂ－ＬｕｎｄｂｅｒｇＯｌｄｅ５．６１８６１激酶通路快速效应的初步研究．中华妇产科杂志，，张丽丽李小平王建六等．雌激素通过子宫内膜癌细胞膜受体激活丝裂原活化蛋白Ｂ信号传导通路的活化．现代妇产科进展，２００５，１４：２７０—２７３郭瑞霞，魏丽惠，王建六．１７１３一雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇３激酶／蛋白激酶酶信号传导通路的激活作用．中华妇产科杂志，２００４，３９：４６９－４７３郭瑞霞，魏丽惠，王建六等．１７１３．雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇３激酶／蛋白激Ｌｅｔｔ，２００３，８（２Ａ）：５２７ＭｏｌＣｅｌｌｔａｒｇｅｔ．ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｍａｊｏｒＰＫＢ／Ａｋｔ－ａａｎｄＢＡ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎＨｅｍｍｉｎｇｓ１—２４９５９ＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００３，２７８（２７）：２４９５ＭＥＫ／ＥＲＫ．Ｊｒｅｑｕｉｒｅｓｄｅｍｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｅｉｎ１７．ａｌｌｙｌａｍｉｎｏ一１７．ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙＫ，ｅｔａｌ．ＭｅｄｕｌｌｏｂｌａｓｔｏｍａＡ，ＭａｃｌｅａｎＣ，ＦｒａｎｋＣａｌａｂｒｅｓｅ２２３７４—２２３７８Ｃｈｅｍ，２００３，７８（２５）：ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ＪＰＫＢ／Ａｋｔｒｏｌｅｅｓｓｅｎｔｉａｌａｌｌｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓｌ（ｉｎａｓｅｏｆｉｎｔｅｇｒｉｎ—ｌｉｎｋｅｄｋｎｏｃｋ－ｏｕｔａ１．ＣｏｎｄｉｔｉｏｎａｌＣ，ｅｔＮＭ，ＯｎｇＴｒｏｕｓｓａｒｄＡＡ，Ｍａｗｊｉ［１６】［１５］【１４】［１３】【１２】Ｕｏ］［９】［８１【７】【６】【５】【４】【３】［２】ｃｏｕｐｌｅｄｍｅｍｂｒａｎｅｏｆａｎＪ．ＩｄｅｎｔｉｔｙＥＪ，ＤｏｎｇＹ，ＦｉｌａｒｄｏＰ，ＰａｎｇＴｈｏｍａｓＭｅｔａｂ，２００９，２０（８）：４０９－４１６Ｅｎｄｏｅｒｉｎｏｌ阴．Ｔｒｅｎｄｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｅｓｔｒｏｇｅｎｎｏｖｅｌｏｆｔｈｅａ１．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＹ，ｅｔＪ，ＰａｎｇＥ，ＱｕｉｎｎＦｉｌａｒｄｏ６２４－６３２ｃｅｌｌｓ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００５，１４６（２）：ｂｒｅａｓｔｈｕｍａｎＮ，ＷａｔａｎａｂｅＫａｎｄａ３２４５ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００７，１４８：３２３６·ｐｌａｓｍａ３０（ＧＰＲ３０）ａｔｃｏｕｐｌｅｄ１２Ｄｅｍａｔｏｌ，２００３，１ｉｎｖｅｓｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ【Ｊ】．ＪＢｃｌ－２ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｔｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｓｔｒｅｓｓ—ｉｎｄｕｃｅｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｉｎｈｉｂｉｔｓｐＧａ１．ＴｈｅＡＧ，ｅｔＤ，ＲｅｃｃｈｉａＡ，ＢｏｎｏｆｉｇｌｉｏＶｉｖａｅｑｕａ１５００．１５０９７１ｉｎｄｕｃｅｄｅｆｆｅｃｔｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｔｈｅｍｅｄｉａｔｅｓＧＰＲ３０ｒｅｃｅｐｔｏｒＲＨＫａｓｌｏｗ导通路中的作用［Ｊ】．中华妇产科杂志，２０１２，４７（４）：２６７－２６９张燕彩，郭瑞霞，乔玉环，等．ＧＰＥＲ在子宫内膜癌细胞雌激素激活Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ信号传ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００６，２０（３）：６３１－６４６ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃａｎｃｅｒｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｉｎｈｙ＆ｏｘｙｔａｍｏｍｆｅｎＤＷｅｉｓｓＪ，１９９２，６（功：２６８４－２６９０ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ叨．ＦＡＳＥＢｃｅｌｌｓ：ｂｉｎｄｉｎｇ，ｅｎｔｒｙ，ａｎｄｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｔａｒｇｅｔａｎｄＬＥＡＳＨａｌｐｅｒｉｎＣｈｅｍ，１９８３，２５８（５）：３３１９Ｂｉｏｌｍｅｍｂｒａｎｅｓ．ＪｉｎＡｄｉｐｉｃｙｔｅｔｏｘｉｎｐｒｏｔｅｉｎ，ｐｅｒｔｕｓｓｉｓＩｓｌｅｔ—ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｂｙｏｓｙｌａｔｉｏｎＡＤＰ—ＲｉｂｉｔｓｔｏｄｕｔｃｙｃｌａｓｅＡｄｅｎｙｌａｔｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｒｅｕｌａｔｏｒｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｇｕａｎｉｎｅｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙＴ．ＬｏｓｓＭｕｒａｙａｍ１９８６，４０：６６１．６８６．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，Ｒｅｖｐｅｒｔｕｓｓｉｓ【Ｊ】．ＡｎｎｕｏｆＢｏｒｄｅｔｅｌｌａｆａｃｔｏｒｓ２４ｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｗｉｔｈｉｎｆｅｃｔｉｏｎｐｅｒｔｕｓｓｉｓＢｏｒｄｅｔｅｌｌａｏｆｏｌｅｒｏｔｅｉｎｒｏｔｅｉｎ—ｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ．Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ，Ｈｅｗｌｅｔｔ，Ｂｕｍｓ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ１３ｅｔａ－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ（６）：１３－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ

Ｊｔ［１７】ＡｌｆａｒｏＤｉｓｅａｓｅｓ，１９９１，１６３：３５５ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＪｏｕｒｎａｌｔｏｘｉｎ．Ｔｈｅｐｅｒｔｕｓｓｉｓ参考文献ｅＭＭ，Ｓｅｒｒａｎｏｇａａ１．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＨＺ，ｅｔＤＡ，ＲｉｎｇＣ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ［１９】Ｃａｒｍｅｃｉ大学学报，２００８，３９（１）：１１．１４［１８】崔慧林，乔健天．ＰＴｘ阻断溶血磷脂酸对大鼠胚胎神经干细胞的促增殖作用．山西医科８３—９６Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ２０１２，２ｌ（７）：１３ＣｅｌｌｌｉｖｅｒｍｏｕｓｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｔｒａｐｏｒｔａｌｅｎｇｒａｔｈｎｅｎｔｅａｒｌｙｅｎｈａｎｃｅｓＧ（ｉ）ｐｒｏｔｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌａ１．ＢｌｏｃｋａｄｅｏｒｐｈａｎａｌｌｄｏｓｅＭＤ．ＷｈａｔＪＭ，Ｊｏｈｎｓｏｎ【２０】Ｒａｅｃａｎｃｅｒ叨．Ｇｅｎｏｍｉｅｓ，１９９７，４５（３）：６０７－６１７ｂｒｅａｓｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈａｓｓｏｃｉａｔｅｄｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙＧ－ｐｒｏｔｅｉｎ—ｃｏｕｐｌｅｄｔｈｅｔｏｈｏｍｏｌｏｇｙＲ１［２１Ｒｅｓ，２００５，７（６）：２４３－２４４Ｃａｎｃｅｒｅｓｔｒｏｇｅｎ【Ｊ】．Ｂｒｅａｓｔｄｏ、Ⅳｉｔｈｈａｓｏｆｔｈｅｄｉｓｔｄｂｕｔｉｏｎｉｎｔｒａｅｅｌｌｕｌａｒａｎｄａ１．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＨ，ｅｔＨ，ＭｏｒｉＫ，ＳａｋａｍｏｔｏＭａｔｓｕｄａ【２５１１４９（１０）：４８４６－４８５６ｅｓｔｒａｄｉｏｌ【Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００８，ａｃｔｉｖａｔｅｄｎｏｔｉｓａｎｄｒｅｔｉｃｕｌｕｍｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｔｏｌｏｃａｌｉｚｅｓｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄａ１．ＧＧ，ｅｔＢ，ＳｃｈｗａｒｚＲｏｈｄｅ—ＳｃｈｕｌｚＣ，【２４】ＯｔｔｏＢｉｏｌ，２００７，２（８）：５３６—５４４ＧＰＲ３０．ＡＣＳｉｎｔｒａｅｅｌｌｕｌａｒｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙｔｈｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓａ１．ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＡＳ，ｅｔＨＤ，ＦｉｅｌｄＣＭ，ＭｉｔｃｈｅｌｌＲｅｖａｎｋａｒ［２３】达及意义．现代妇产科进展，２００９，１８：８８１．８８４．郭瑞霞，郭会敏，苑中甫，等．Ｇ蛋白偶联受体３０和磷酸化ＡＫＴ在子宫内膜癌中表【２２】１６２５－１６３０ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ】．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，３０７（５７１５）：ｃｅｌｌｒａｐｉｄｍｅｄｉａｔｅｓｅｓｔｒｏｇｅｎｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅａ１．ＡＬＡ，ｅｔＤＦ，ＳｋｌａｒＣＭ，Ｃｉｍｉｎｏｓａｏｎｃｏｎｖｅｒｇｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄａ１．ＶｉｒｔｕａｌＳＭ，ｅｔＣＭ，ＹｏｕｎｇＣＣ，Ｒｅｖａｎｋａｒ［２７】Ｂｏｌｏｇａ０１】：９７７—９８１肿瘤，２０１ｌ，１ｌ【２６】叶佳，张沐等．Ｇ蛋白偶联受体３０在子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞中的表达及亚细胞定位．９４－９９４４１（１）：ｆｏｒｍａｔｉｏｎ唧．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｌｅｔｔ，２００８，ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｐＧｂｙｒｅｌａｘａｔｉｏｎＣＧ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＡＡ，ＳｏｂｅｙＢＲ，Ｍｉｌｌｅｒ［２８】ＢｒｏｕｇｈｔｏｎＢｉｏｌ，２００６，２（４）：２０７．２１２ＣｈｅｍＧＰＲ３０叨．Ｎａｔｆｏｒａｇｏｎｉｓｔ０１Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０ＣｉｔｅＨｅａｒｔｃａｒｏｔｉｄａｒｔｅｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｒａｔｉｎａｇｏｎｉｓｍ３０ｒｅｃｅｐｔｏｒｃｏｕｐｌｅｄ２９８（３）：Ｈ１０５５－１０６１ｒａｕｅｖａｎｋａｒｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄｒｏｔｅｉｎ．，ｅｌｅｃｔｉｖｅｅｎｅ（ＧＰＲ３０）ｗｉｔｈ

效应的研究Ｇ蛋白偶联雌激素受体ＧＰＥＲ与雌激素结合介导的非转录综述２６一系列非转录效应进行综述。物特异性结合能够发挥快速生物学效应。本文就ＧＰＥＲ与雌激素结合后引发的分布的靶组织中表达量较高。既往已有多项研究证实ＧＰＥＲ与雌激素或其衍生包括脑组织、心、肝、肾、肺脏以及前列腺组织和胎盘组织等，并且在雌激素激素结合的膜雌激素受体的所有结构和特征，它广泛表达于机体多种组织细胞，又名Ｇ蛋白受体３０（ＧＰＲ３０），是一种新型膜相关的雌激素结合蛋白，具备与雌效应”或“非核效应＂最可能的候选分子。Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ），究热点，经过研究发现Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）是介导雌激素“非转录速效应＂，该过程对转录和翻译抑制剂不敏感。后者是近几年国内外学者们的研经过基因的转录、翻译等过程，故称“非转录效应”或“非核效应”，又称“快参与细胞的增殖过程，由于此过程不信号传导通路，通过通路中的效应分子，主要与胞膜或胞浆中的ＥＲ结合后，在短短几秒至数分钟内可快速激活细胞内长期效应，通常对转录和翻译抑制剂敏感；二是新发现的非转录效应，即雌激素转录，效应蛋白的表达，最终促进细胞的增殖，此过程通常需要数小时以上，又称ｅｌｅｍｅｎｔ，ＥＲＥ）结合后促进相应基因的ｅｓｐｏｎｓｅ基因的雌激素反应元件ｆｅｓｔｒｏｇｅｎｒ雌激素与雌激素受体＠心结合后，受体发生二聚体化（ｄｉｍｅｒｉｚｅ），在细胞核内与广泛而重要的作用。目前其作用机制主要有两种理论：一是经典的转录效应，即而且在保护心血管系统、维持骨骼代谢、中枢神经系统正常功能等方面发挥着肾上腺皮质产生。雌激素不仅在维持机体生殖系统正常功能方面发挥重要作用，雌激素主要是由卵巢与胎盘产生的一种类固醇激素，也有少量的雌激素由乔玉环审校马秀英综述综述

ＧＰＥＲ的结构特征、组织分布及亚细胞定位１２７膜，有雌激素特异性结合位点，表明，Ｇ蛋白偶联雌激素受体在细胞膜上表达。肾细胞（ＨＥＫ－２９３）和Ｇ蛋白偶联雌激素受体表达阳性的在人胎盘细胞表面的亚细胞定位，有研究发现【８】：在转染了Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）的人胚激素受体，其结构和特性与膜雌激素结合蛋白相同，但目前尚未确定其详细的的活化呈正相关。现已证实Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）是一种膜相关的雌期晚的子宫内膜癌，其表达是比较常见的，也证实Ｇ蛋白表达和蛋白质激酶Ｂ内膜以及子宫内膜癌组织中均有高表达，且低分化，入侵肌肉深度高与临床分有ＧＰＥＲ蛋白的过度表达【５１。既往研究发现【６’７１，ＧＰＥＲ蛋白在非典型增生子宫还证实在未分化甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤细胞中均前列腺，乳腺，心脏，子宫，卵巢，及胎盘等组织细胞中皆有表达［４１。许多研究分布在机体组织中，并且在雌激素分布的靶组织中表达量较高，现在已证实在可能在细胞信号转导的过程中发挥作用。Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）广泛三联体（ＤＩＷ），该结构是Ｇ蛋白偶联受体家族（ＧＰＣＲＳ）的一个保守的序列，个细胞外袢，此外，还包含一个天冬氨酸基（Ａｓｐ）．精氨酸（Ａｒｐ）一酪氨酸（Ｘｙｒ）３个Ｎ．糖基化位点，其中有两个高度保守的半胱氨酸残基分别位于第一和第二内与细胞外循环交替的细胞内外袢［３１。Ｇ蛋白偶联受体（ＧＰＥＲ）在细胞外具有体（ＧＰＥＲ）具有７个疏水性跨膜区，包括由２０至２６个氨基酸构成的６个细胞用ＧＰＲｌ寡核苷酸探针克隆得到的产物做比较，发现两者相似［２１；Ｇ蛋白偶联受员具有高度同源性，经ｅＤＮＡ的聚合酶链反应进行扩增，将其得到的产物和应氨基酸分子，分析其核酸和氨基酸序列，结果显示其和Ｇ蛋白偶联受体家族成区；和一个开放阅读框的框架（ＯＲＦ），该框架长１１２８ｂｐ；该蛋白质含有３７５个列全长２６０４ｂｐ，包括５’端一长５０４ｂｐ的非编码区；３’端一长９７２ｂｐ的非编码员之一，具有典型的七次跨膜结构特征，其基因定位于染色体７ｐ２２，ｅＤＮＡ序ＧＰＥＲ）。Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）是Ｇ蛋白偶联受体家族（ＧＰＣＲｓ）成ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｅｓｔｒｏｇｅｎｃｏｕｐｌｅｄｐｒｏｔｅｉｎ录效应”，又被命名为Ｇ蛋白偶联雌激素受体（Ｇ名为Ｇ蛋白偶联受体３０（ＧＰＲ３０），因为后来研究发现其参与了雌激素的“非转物ＧＰＣＲ－Ｂｒ的ｅＤＮＡ，经过基因库检验证实它是一种新的Ｇ蛋白受体，曾被命Ｃａｒｍｅｃｉ等人【１１从人乳腺癌细胞系ＭＣＦ．７中分离出一种Ｇ蛋白偶联受体的类似Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）在２０世纪９０年代末首次被发现，当时

，只究证明ＧＰＥＲ具有与雌激素结合的所有结构特征，Ｔｈｏｍａｓ等１９］研究发现，在可使后者激活，进而引起ＧＰＥＲ发挥其生物学功能。至目前研究阶段，很多研现了ＧＰＥＲ的特异性配体为Ｇ一１，两者具有很强的亲和力，Ｇ．１与ＧＰＥＲ结合后究进展逐渐否定了这种说法。Ｂｏｌｏｇａ等【”】，使用模拟和分子生物学筛选方法发细胞膜上。ＧＰＥＲ的配体在最早研究时期被认为是肽类或糖蛋白类物质，随着研况有关，但多数研究者认为ＧＰＥＲ的亚细胞定位主要在细胞器内质网，而不是无确切的结论，这可能和ＧＰＥＲ的功能状态及机体组织、细胞表达ＧＰＥＲ的情细胞内管网结构上，可能是粗面内质网。到目前为止，对ＧＰＥＲ亚细胞定位仍ＧＰＥＲ在子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞质内的阳性表达率显著高于细胞膜，主要位于上亦有ＧＰＥＲ的表达，但细胞膜上未见有ＧＰＥＲ表达。近期国内一项研究发现【１４Ｊ：［１３１采用标记的细胞器，发现ＧＰＥＲ主要定位于神经元的高尔基体上，在内质网受体（ＧＰＥＲ）均表达于内质网，即ＧＰＥＲ定位在细胞器内质网上。Ｍａｔｓｕｄａ等表达的ＧＰＥＲ蛋白进行定位，结果表发现上述转染细胞中，Ｇ蛋白偶联雌激素人胚肾细胞系ＨＥＫ２９３与子宫内膜癌细胞系ＨＥＣ５０转染ＧＰＥＲ基因，然后对其联雌激素受体（ＧＰＥＲ）的亚细胞定位进行研究，给乳腺癌细胞系ＭＤＡ—ＭＢ２３１，蛋白主要定位于内质网的细胞器）Ｏｔｔｏ等【１２】应用免疫荧光双标记法对Ｇ蛋白偶质标记，定位然后观察ＧＰＥＲ蛋白的表达标记的区域的区域重叠，发现ＧＰＥＲ胞骨架的结构，例如。线粒体，ｗｉｔｈｉｎｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ网，高尔基体和肌动蛋白蛋白发现Ｇ蛋白偶联雌激素受体出现，以便进一步精确定位在细胞内的网站内的细共聚焦荧光显微镜观察到Ｇ蛋白偶联雌激素受体，在细胞内的管状网络结构上记区域相重叠，结果发现ＧＰＥＲ蛋白主要定位于细胞器内质网。（在亚细胞内用高尔基体和肌动蛋白等进行标记，然后观察有ＧＰＥＲ蛋白表达的区域是否与标为进一步精确定位其亚细胞位点，在细胞内的骨架结构上，如线粒体，内质网，ＧＰＥＲ的亚细胞进行定位观察，结果发现ＧＰＥＲ出现在细胞内管状的网络结构上，应用绿色荧光对ＣＯＳ．７细胞表达的ＧＰＥＲ进行标记，在共聚焦荧光显微镜下对在细胞质中有表达。另外Ｒｅｖａｎｋａｒ等人【３’１ｌ】对ＧＰＥＲ的亚细胞定位进行研究时，联雌激素受体（ＧＰＥＲ）在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达，结果发现ＧＰＥＲ只ｏＪ采用免疫组化ＳＰ法检测Ｇ蛋白偶明ＧＰＥＲ表达于细胞膜上。但Ｆｉｌａｒｄｏ等人【ｌ雌激素受体表达的药物后，发现细胞膜结合Ｅ２的效果发生相对应的变化，亦说不表达的乳腺癌细胞膜上，有Ｅ２的特定结合位点，采用增强或抑制Ｇ蛋白偶联Ｔｈｏｍａｓ等【９Ｊ人发现，在Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）表达而雌激素受体（ＥＲ）

２ｑ两种人乳腺癌细胞系进行研究发现：在表达ＧＰＥＲ的人乳腺癌细胞系ＭＣＦ．７中，ＲＸ等１１７】对核，通过转录调节方式，促进细胞增生，延长细胞生长周期。Ｓｏｎｇ调节激酶（ＥＩⅨ１／２），进一步使ＭＡＰＫ的磷酸化，磷酸化的ＭＡＰＫ转移到细胞ＭＥＫ级联反应，迅速激活细胞外信号双位点，经由下游分子Ｓｒｃ，Ｒａｓ，ｇａｆ９过程中发挥了重要的作用。另外，雌激素与ＧＰＥＲ结合后激活苏氨酸，酪氨酸瘤的转移扩散与ＭＡＰＫ异常表达密切相关，ＭＡＰＫ可能在肿瘤细胞的恶性行为信号传入细胞核内，参与细胞的增殖和分化。有研究表明细胞的恶性转化和肿许多致癌物质通过各种途径使ＭＡＰＫ磷酸化激活，磷酸化的ＭＡＰＫ将细胞浆内此途径是雌激素完成细胞内信号转导的重要方式，多种生长因子，细胞因子和总结既往研究结果，其作用机制主要包括以下四种途径：１．ＥＲＫ－ＭＡＰＫ途径：酶Ｃ（ＰＫＣ），蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）、脂激酶和上调原癌基因ｃ—ｆｏｓ表达来实现。ｃＡＭＰ、ＮＯ等物质，自身磷酸化激活受体酪氨酸激酶（ＲＴＫｓ），并激活蛋白激理性增生，是肿瘤发生的重要因素之一。其作用机制主要是通过释放Ｃａ２＋、应【１６】，即雌激素的“非转录效应”，该效应常导致细胞增殖过快，使细胞出现病在几秒至几分钟内迅速完成细胞内信号传导，介导雌激素的快速促细胞增殖效１３．Ｅ２）和ＧＰＥＲ蛋白结合，激活细胞内第二信使，Ｂ．雌二醇（１７要的作用，１７ＧＰＥＲ主要通过介导调节细胞的增殖分化，在细胞增殖凋亡过程中发挥着重ＧＰＥＲ蛋白介导的病理效应２．１２．ＧＰＥＲ蛋白介导的非转录效应及作用机制昔芬）结合，且二者都是ＧＰＥＲ的激动剂。现，ＧＰＥＲ亦能与ＩＣｌｌ８２７８０（纯抗雌激素药物）和ＯＨＴ（对抗雌激素药物他莫ＣＭ等人【ｌｌ】研究发Ｑ．雌二醇、孕酮、睾酮、皮质醇等无结合力。Ｒｅｖａｎｋａｒ与１７１３．Ｅ２）具有很强的结合能力，但与雌酮、雌三醇结合能力非常低，雌二醇（１７１３．等人还发现ＧＰＥＲ与各类激素结合的能力差异性较大，如ＧＰＥＲ蛋白和１７去了与雌激素结合的能力，说明ＧＰＥＲ具有与雌激素结合的能力，后来Ｔｈｏｍａｓ能力，应用ＧＰＥＲ干扰物质对ＧＰＥＲ的表达进行干扰后，人类胚胎肾细胞便失导入转染ＧＰＥＲ的ｅＤＮＡ分子后，发现人胚胎肾细胞就拥有了与雌激素结合的有很强的结合能力；而在人类胚胎肾细胞中（ＧＰＥＲ蛋白与ＥＲ均阴性表达），ＧＰＥＲ阳性表达而ＥＲ阴性表达的人乳腺癌细胞系ＳＫＢＲ３中，细胞膜与雌激素

中，雌激素不能快速激活Ｅｒｋ－１／－２，但在导入ＧＰＥＲ基因后，乳腺癌细胞株ｌ１３阳性表达的乳腺癌细胞株ＭＤＡ—ＭＢ一２３Ｑ均阴性表达但ＥＲＧＰＥＲ蛋白及ＥＲ活丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）即细胞外信号调节激酶．１／－２（Ｅｒｋ－１／－２），在只表达ＧＰＥＲ蛋白而无ＥＲ表达的人乳腺癌细胞株ＳＫＢＲ３中，雌激素可快速激（ＥＲＫ），促进肿瘤细胞生长增殖及细胞周期进剧１８。２１】。Ｆｉｌａｒｄｏ等研究发现，在传导通路分子促分裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ），同时活化细胞外信号调节激酶因子（ＨＢ—ＥＧＦ）释放，接着ＨＢ．ＥＧＦ反式激活ＥＧＦＲ蛋白，并激活其下游信号进而活化细胞膜表面的间质金属蛋白酶（ＭＭＰ），后者促使肝素结合性表皮生长ｒ二聚体激活Ｓｒｅ家族酪氨酸激酶，使与其相连的蛋白酪氨酸残基磷酸化，１３而Ｇ发挥其非转录效应。ＧＰＥＲ蛋白与雌激素结合后，先是Ｇ蛋白三聚体解离，继现，雌激素与ＧＰＥＲ蛋白结合后通过活化表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）传导途径ＥＲＫ－ＭＡＰＫ信号传导通路必需的物质分子。２．ＥＧＦＲ－ＥＲＫ途径：既往多项研究发后，雌激素又能激活ＥＲＫ信号传导通路，由此可证明ＧＰＥＲ是雌激素激活ＭＤＡ．ＭＢ２３１中，雌激素却无此效应，而给ＭＤＡ—ＭＢ２３１细胞转染ＧＰＥＲ基因雌激素可迅速激活ＥＲＫ信号传导通路，在不表达ＧＰＥＲ的人乳癌细胞系３０是存在的。但也有研究发现，在某些细胞系中，ｃＡＭＰ的活化可增加由Ｂ—Ｒａｆ制剂与ＡＣ抑制剂均可抑制ＡＣ．ｃＡＭＰ．ＰＫＡ．ＭＡＰＫ途径的激活，证明了该途径细胞内复杂的信号传导途径，晟终引起一系列生物学效应。蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）抑（ＡＣ）引起第二信使ｃＡＭＰ水平升高，进而引发ＰＫＡ途径的级联反应，激活ＡＣ—ｃＡＭＰ．ＰＫＡ．ＭＡＰＫ途径：雌激素与ＧＰＥＲ蛋白结合后激活腺苷酸环化酶可少的物质，而其具体作用机制尚不清楚，需要进一步研究。３．ＥＧＦＲ／ＥＲＫ细胞信号转导通路活化及雌激素和Ｇ．１诱导原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达必不ｃ．１０ｓ表达的作用，由此可以说明在卵巢癌发生发展中，ＧＰＥＲ蛋白和ＥＲＱ是Ｑ）反义寡聚核苷酸（Ｅ刚ＡＳ．ＯＤＮ）后，均可降低雌激素和Ｇ－１诱导体Ｑ（ＥＲ体（ＧＰＣＲ）的抑制剂ＰＴＸ（百日咳毒素）或ＥＲ拮抗剂ＩＣＩｌ８２７８０或雌激素受经过ＥＧＦ刚ＥＲＫ信号传导通路诱导原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达，但加入Ｇ蛋白偶联受Ｑ阳性表达的卵巢癌细胞株ＢＧ．１中，雌激素和ＧＰＥＲ特异性配体Ｇ．１均可ＥＲＧＰＥＲ蛋白的表达，提高细胞对雌激素的反应。然而Ａｌｂａｎｉｔｏ等人【２４】发现，在中，表皮生长因子（ＥＧＦ）可通过活化表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）快速上调１３均阴性表达的乳腺癌细胞Ｑ、ＥＲＭＡＰＫ即ＥＲＫｌ／２的效应瞄。２３】。此外，在ＥＲ１获得对雌激素敏感的性能，说明ＧＰＥＲ介导了雌激素快速活化ＭＤＡ．ＭＢ．２３

（删）均能激活ＧＰＥＲ阳性表达的人乳腺癌ＳＫＢＲ３细胞中磷脂３１用，并且对神经元活动，神经保护和基因转录有关键作用。ＭＡＰＫ快速磷酸化，ＭＡＰＫ活化对神经元和大脑的一部分活动有隐蔽的调节作温调节等功能维持稳定。ＧＰＥＲ和生理剂量的雌激素结合后经过信号传导通路使体系统中，ＧＰＥＲ通过对下丘脑神经元活动的调节，使生殖系统，压力应答和体再摄取，对临床上治疗更年期女性的抑郁症及潮热有一定的效果。在下丘脑．垂用。有研究发现，ＧＰＥＲ与雌激素结合产生的“非基因转录效应”可增加５－ＨＴ与ＧＰＥＲ结合产生的“非转录效应”对神经元系统免受损伤起到一定的保护作１．ＧＰＥＲ与神经内分泌系统：ＧＰＥＲ在中枢神经系统中分布广泛，雌激素ＧＰＥＲ在不同的机体组织系统中的生理作用：分泌神经系统，心血管系统，骨骼组织方面有一定的保护作用，下面分别介绍结合后不仅能引起病理过程，而且还能独立介导雌激素的多种生理功能，在内ＧＰＥＲ蛋白的生理效应：随着对ＧＰＥＲ蛋白的深入研究发现，其与雌激素３．２介导的信号通路有可能阻断肿瘤的发生及进展，为治疗肿瘤疾病提供新途径。述四种信号传导通路在肿瘤的发生发展中起着重要作用，阻断肿瘤细胞中ＧＰＥＲ说明ＧＰＥＲ蛋白是激活Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ通路信号传导中的必要物质。ＧＰＥＲ介导的上中还发现，ＧＰＥＲ结合雌激素活化Ｐ１３Ｋ前，先有ＥＧＦＲ的反式活化。这些研究显示无ＰＩＰ３的核堆积效应，提示ＧＰＥＲ介导了其信号的转导过程，在研究过程胞核与内质网上，应用ＧＰＥＲ反义寡聚核苷酸消除内源性ＧＰＥＲ的表达，结果（Ｐ１３Ｋ），进而使三磷酸磷脂酰肌醇（Ｐ口３）及蛋白激酶（ＰＫＢ／ＡＫＴ）聚集于细列生物学效应，最终促进细胞生长增殖。Ｒｅｖａｎｋａｒ等［３１发现：雌激素与他莫昔芬化的ＡＫＴ发生核内聚，引起ＮＯＳ丝氨酸磷酸化，ＮＯ释放增加，进而引发一系胞膜表面聚集，接着抗凋亡和促进细胞增殖的激酶ＡＫＴ移至膜磷脂被活化，活后快速激活磷脂酰肌醇激酶（Ｐ１３Ｋ），从而导致三磷酸磷脂酰肌醇（ＰＩＰ３）在细Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ信号传导途径。该信号途径活化过程大致如下：雌激素与ＧＰＥＲ结合究。４．Ｐ１３Ｋ－ＡＫＴ－ＮＯ途径：现已经证实，雌激素与ＧＰＥＲ结合后亦可激活导的信号传导机制及发挥的生物学效应尚不太清楚，有待研究者们的进一步研结合后引起ｃＡＭＰ水平增高可抑制ＭＡＰＫ的活性。目前ＧＰＥＲ蛋白经该途径介介导的ＥＲＫ的活化，进而激活ＭＡＰＫ，然而在另一些细胞中，雌激素与ＧＰＥＲ

３２（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）等均能使原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达上调，促使甲状腺癌细胞加速增殖，１３．Ｅ２，４．羟基他莫昔芬（ＯＨＴ），木黄酮Ｑ均阳性表达），１７中（ＧＰＥＲ和ＥＲ胞的生长增殖速度明显提高。Ｖｉｖａｃｑｕａ等【１副研究发现，在甲状腺癌ＷＲＯ细胞甲状腺癌细胞进行研究发现，用一定浓度的雌激素刺激甲状腺癌细胞后，癌细雌激素在甲状腺癌发生发展中有着重要功能及作用。ＫｕｎａｒＡ等【３８Ｊ对体外培养的既往研究证实长期暴露于高雌激素内环境可增加患甲状腺癌的风险，说明ＧＰＥＲ与甲状腺癌３．１３．ＧＰＥＲ在肿瘤发生过程中的作用促进骨细胞生长。成骨细胞中的环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ），环磷酸鸟苷（ｃＧⅧ）和钙离子的含量，以钙离子增加，进而合成３磷酸肌醇（Ｐ１３Ｋ）和甘油二酯，也可增加机体内初级生成。雌激素还可以通过对ＰＴＸ敏感的Ｇ蛋白引起钙离子快速内流，使细胞内细胞因子，进一步激活核转录因子ＮＦ．ｋＢ，启动基因表达，最终促进新骨细胞疏松的非转录效应，雌激素通过快速活化成骨细胞中的白介素．６与白介素．１等功能有调节作用，在青春期能调节骨骼纵向生长，另外，ＧＰＥＲ可介导改善骨质３．ＧＰＥＲ和骨骼系统：雌激素和ＧＰＥＲ结合激活信号转导通路后对骨组织的梗塞范围，并且可使心脏避免产生缺血再灌注损伤【３¨¨。活化后，通过抑制线粒体通透性转换孔开放，促进心脏功能恢复，可降低心肌扩张冠脉，使心脏血流增加。另有研究表明，在患有心肌梗塞大鼠心脏内，ＧＰＥＲＧＰＥＲ结合后，可激活冠脉上电导门控钙离子通道和电兴奋Ｋ＋通道，ｃＥ＋内流，通过调节细胞内钙离子的浓度而发挥其作用【３Ｍ４１。另有研究发现【３５】：雌激素与信号调节激酶（ＥＲＫｌ／２），并最终导致转录因子表达，促进细胞内钙离子动员，酶（ＭＡＰＫＳ），磷酸肌醇３激酶（Ｐ１３Ｋ），进而活化蛋白激酶Ｂ（Ａｋｔ）和细胞外因子，扭转激活表皮生长因子受体，触发下游事件，如活化分裂素激活蛋白激的产生减少，并可直接清除超氧阴离子【３０】，同时，此过程会促使释放表皮生长快速信号传导途径激活环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、鞘氨醇激酶（ＳｐｈＫ），使过氧化物和内皮细胞等均有分布，雌激素与ＧＰＥＲ结合后可活化Ｇ蛋白异三聚体，通过２．ＧＰＥＲ和心血管系统：研究发现【２５‘２９】：ＧＰＥＲ在心肌细胞，平滑肌细胞

ＧＰＥＲ与黼１细胞中，雌激素不能诱究发现，在无ＧＰＥＲ表达的乳腺癌细胞系ＭＤＡ．ＭＢ２３胞转染ＧＰＥＲ特异性反义寡核苷酸后，可抑制该细胞生长增殖，此外，还有研ＧＰＥＲ特异性配体Ｇ．１能够诱导ｃ．ｆｏｓ表达上调，促进该细胞生长增殖，给该细且雌激素均可诱导两个细胞系中原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达上调；在ＳＫＢｒ３细胞内，乳腺癌细胞系ＭＣＦ．７（ＥＲ阳性表达）和ＳＫＢｒ３（不表达ＥＲ）均有ＧＰＥＲ表达，腺癌细胞中的研究，主要借助于ＭＣＦ．７和ＳＫＢｒ３两个细胞系，研究表ＩｊｙＪ［９以２“１１：感，使肿瘤细胞增殖，由此发现了肿瘤细胞增殖的新途径。最初对ＧＰＥＲ在乳激活ＥＧＦＲ或Ｐ１３Ｋ等信号转导途径，使ＥＲ阴性的乳腺癌患者仍然对雌激素敏抗雌激素药物治疗效果较差。后来研究发现【５，４０１，ＧＰＥＲ蛋白能单独介导雌激素性的乳腺癌患者对抗雌激素药物治疗具有良好的治疗效果，但仍有部分患者对乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，亦是一种激素依赖性肿瘤，大多数ＥＲ阳３２细胞增殖。的甲状腺癌中可促进ＥＲＫｌ／２和ＡＫＴ磷酸化水平增高，诱导ＤＮＡ合成，从而促进转染ＧＰＥＲ－ｓＲＮＡ（＋）组相比，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），说明ＧＰＥＲ在未分化磷酸化水平，结果显示随着ＧＰＥＲ蛋白表达下降，其磷酸化水平也下降，同样与未－ｓＲＮＡ（＋）质粒组相比，差异具有统计学意义（Ｐ一０．０５），且检测ＥＲＫｌ／２和ＡＫＴ势；在转染ＴＧＰＥＲ－ｓＲＮＡ（＋）质粒后，ＧＰＥＲ蛋白表达明显下降，与未转染ＧＰＥＲ子ＥＲＫｌ／２和ＡＫＴ磷酸化水平，随作用时间延长呈现先增高后逐渐降低的变化趋１３．Ｅ２可促进ＦＲＯ细胞增殖；接着用Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ法检测信号传导因结果显示：１７１３．Ｅ２刺激ＦＲＯ细胞不同时间后，采用流式细胞仪检测ＦＲＯ细胞的增殖情况，１７等幽Ｊ近期研究发现，在体外培养的甲状腺未分化癌细胞ＦＲＯ中，用一定浓度的素诱导甲状腺癌发生过程，并在甲状腺癌发生发展过程中发挥了重要作用。刘等，诱导ｃ．ｆｏｓ表达的效应均能被抑制，上述研究均可以说明ＧＰＥＲ参与了雌激剂，如ＭＡＰＫ抑制剂ＰＤ、ＥＧＦＲ抑制剂ＡＧｌ４７８、Ｐ１３Ｋ抑制剂渥曼青霉素（ＷＭ）胞中，转染ＧＰＥＲ反义表达质粒后，或分别加入信号传递通路中关键步骤抑制效应也相应下调。另外还发现，在ＥＲａ和ＥＲｌ３均阴性表达的甲状腺癌ＡＲＯ细用ＭＡＰＫ激酶特异性抑制剂ＰＤ９８０５９作用于ＷＲＯ细胞时，诱导ｃ—ｆｏｓ表达的１３．Ｅ２）等诱导原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达上调的效应消失；并且应核苷酸，雌激素（１７然而，在不干扰ＥＲａ表达的情况下，给ＷＲＯ细胞转染特异性ＧＰＥＲ反义寡聚

３４中，ＧＰＥＲ阳性表达率显著高于低度恶性的卵巢癌，且ＧＰＥＲ表达越高，患者生达，进而促进卵巢癌细胞增殖。Ｓｍｉｔｈ等【２ｌ】研究发现：在高度恶性上皮性卵巢癌化ＥＧＦＲ－ＭＡＰＫ信号传导途径，且该过程亦需要ＥＲａ参与，诱导ｃ—ｌｏｓ基因表Ａｌｂａｎｉｔｏ等【２４】在后续研究中发现，雌激素与卵巢癌细胞中ＧＰＥＲ结合，可快速活并且在此过程中ＥＲＱ和ＧＰＥＲ起协同作用，共同促进卵巢癌的发生发展。转导通路中以及雌激素和Ｇ．１诱导原癌基因ｃ．ｆｏｓ的表达过程中是不可缺少的，Ｑ与ＧＰＥＲ阳性表达在激活ＥＧＦＲ／ＥＲＫ信号低的情况，表明在卵巢癌中，ＥＲ核苷酸质粒的卵巢癌细胞中，均发现雌激素与Ｇ．１诱导的原癌基因ｃ．１０ｓ表达降Ｑ和转染ＧＰＥＲ反义制剂百日咳毒素（ＰＴＸ），ＥＲ拮抗剂ＩＣｌｌ８２７８０，转染ＥＲ是通过ＥＧＦＲ／ＥＲＫ的信号转导通路来完成的。后来研究发现，在采用ＧＰＣＲ抑Ｅ，Ｄｌ与Ａ都有上调作用，已经证实该过程中Ｇ．１和雌激素发挥的生物学效应异性配体Ｇ．１与雌激素均可诱导原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达提高，并且对细胞周期蛋白Ｑ阳性表达的卵巢癌细胞株ＢＧ—ｌ中，ＧＰＥＲ特Ａｌｂａｎｉｔｏ等人【４３】研究证明，在ＥＲ卵巢癌的发生发展过程中，雌激素起着重要作用，但其具体机制还不明确。卵巢癌是一种女性生殖系统常见肿瘤，死亡率居各种妇科肿瘤之首，在ＧＰＥＲ与卵巢癌３．３乳腺癌中的作用机制尚不十分明确，有待于研究者们进一步探讨研究。巴转移，患者年龄及肿瘤病理学分期等亦无明显相关性。到目前为止，ＧＰＥＲ在标志物人类表皮生长因子受体（ＨＥＲ－２／ｎｅｕ）表达无明显关系，ＧＰＥＲ表达和淋和肿瘤转移标志物的关系进行了研究，结果显示：（｝ＰＥＲ的ｍＲＮＡ水平和转移ＷＨ等【４２ｌ也对ＧＰＥＲ表达恶性生物学行为及侵袭转移有密切关系。但后来Ｋｕｏ者表达呈正相关（Ｐ＝Ｏ．０１４），此项研究结果说明了ＧＰＥＲ过度表达可能与乳腺癌究还同时检测了肿瘤转移标志物ＨＥＲ－２／ｎｅｕ与ＧＰＥＲ表达关系，结果显示，二占４３％，均不表达比例占１９％，二者表达具有显著的相关性（Ｐ＜Ｏ．０５）；该研内乳腺癌组织（４２％），在浸润性乳腺癌组织中ＧＰＥＲ和ＥＲ同时阳性表达比例进行研究，结果显示：ＧＰＥＲ阳性表达率在侵袭性乳腺癌组织（６２％）高于导管的作用，对不同病理类型乳腺癌组织中ＧＰＥＲ的表达情况及其与临床病理关系ｏｊ为进一步了解Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）在乳腺癌细胞系中Ｆｉｌａｒｄｏ等ｕ基因表达，上述研究均说明ＧＰＥＲ介导了雌激素促乳腺癌细胞增殖的过程。导原癌基因ｃ一南ｓ表达，在给该细胞转染ＧＰＥＲ质粒后，雌激素却能够诱导ｃ．ｆｏｓ

触雌激素或三氧苯胺（吖心洒），能够加快女性的生殖系统上皮细胞增殖，所以，因素之一。三氧苯胺（ＴＡＭ）常用于乳腺癌的治疗，但研究结果表明，长期接后，可消除原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达的效应，表明ＧＰＥＲ是诱导原癌基因ｃ．ｆｏｓ表达表达，加速子宫内膜癌细胞的增殖，但是当加入转染ＧＰＥＲ反义寡核苷酸（ＡＯＮ）芬（ＯＨＴ）可诱发子宫内膜癌细胞株（Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ）中原癌基因ｃ．ｆｏｓ关系进行过研究。Ｖｉｖａｃｑｕａ掣１９Ｊ研究人员发现，雌激素（Ｅ２）和４．羟基他莫昔性结合发挥不同的生物学效应。既往已有众多研究者对ＧＰＥＲ与子宫内膜癌的能的候选分子，它广泛表达于机体多种组织细胞，能与雌激素或其衍生物特异现Ｇ蛋白偶联雌激素受体（ＧＰＥＲ）是介导“非转录效应”或“非核效应＂最可核效应”，又称“快速效应”，该过程对转录和翻译抑制剂不敏感。经过研究发程，由于此过程不经过基因的转录、翻译等过程，故称“非转录效应＂或“非可快速激活细胞内信号传导通路，通过通路中的效应分子，参与细胞的增殖过转录效应，雌激素主要与胞膜或胞浆中的ＥＲ结合后，在短短几秒至数分钟内通常对转录和翻译抑制剂敏感；二是非通常需要数小时以上，又称长期效应，ｅｌｅｍｅｎｔ，ＥＲＥ）结合后促进相应基因的转录，促进细胞的增殖，此过程ｒｅｓｐｏｎｓｅ后，受体发生二聚体化（ｄｉｍｅｒｉｚｅ），在细胞核内与基因的雌激素反应元件（ｅｓｔｒｏｇｅｎ作用机制主要有两种理论：一是转录效应，即雌激素与雌激素受体（ＥＲ）结合内膜癌的具体作用机制尚不十分清楚。经过国内外众多学者长期研究，目前其大患子宫内膜癌的风险，但在子宫内膜癌的发生发展过程中，雌激素促发子宫着女性的健康及生命。众所皆知，长期无孕激素拮抗的高水平雌激素刺激会加用，子宫内膜癌的发病率呈上升态势，而且发病年龄越来越年轻化，严重威胁性肿瘤来源于子宫内膜癌。由于人类平均寿命的增加以及雌激素替代治疗的应绝经后的妇女，是妇科最常见的三大恶性肿瘤之一，约２０％一３０％女性生殖道恶子宫内膜癌是来源于子宫内膜上皮细胞的恶性肿瘤，主要见于围绝经期及ＧＰＥＲ与子宫内膜癌３．４深入研究ＧＰＥＲ在卵巢肿瘤中具体作用机制，可能为治疗卵巢肿瘤提供新方法。后明显相关。以上研究均证明了ＧＰＥＲ在卵巢癌的发生发展中起着重要作用，存率率越低，说明ＧＰＥＲ在卵巢癌组织中的表达情况与卵巢癌的恶性程度及预

ＥＲ非依赖性的。在ＥＲ阳性细胞（Ｉｓｈｉｋａｗａ）中，通过两种机制（转录作用及非赖性的，Ｅ２非转录效应在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞是ＥＲ依赖性的，而在ＨＥＣ一１Ａ细胞是作用的差异，可能是由于两种细胞内ＥＲ水平不同所致，因Ｅ２转录效应是ＥＲ依胞促增殖作用不明显，Ｅ２对Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞和ＨＥＣ．１Ａ细胞增殖，细胞周期进展验结果显示，（１）Ｅ２对Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞具有明显的促增殖作用，而对ＨＥＣ．１Ａ细期的影响，初步探讨阻断ＧＰＥＲ介导的信号通路治疗子宫内膜癌的可能性。实激素（Ｅ２）作用下子宫内膜癌细胞Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ细胞增殖凋亡和细胞周ｔｏｘｉｎ，ＰＴＸ）对雌一步研究。笔者通过观察ＧＰＥＲ抑制剂百日咳毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ表达，及ＧＰＥＲ蛋白表达在子宫内膜癌细胞增殖和凋亡中的具体作用，有待进发展的过程中，扮演着一个重要的角色，但如何抑制子宫内膜癌中ＧＰＥＲ蛋白和ｐ－ＡＫＴ表达作用逐渐减弱；上述试验结果表明，ＧＰＥＲ在子宫内膜癌产生及子宫内膜癌细胞（脏Ｃ—ｌＡ和Ｉｓｈｉｋａｗａ）中，随Ｅ２浓度的逐渐降低，ＧＰＥＲ表达ＦＩＧＯＩＩ．ＩＩＩ期中明显高于在ＦＩＧＯＩ期中。还研究发现【４８Ｊ：将不同浓度的Ｅ２用于明显低于在中、低分化内膜癌组织中的阳性表达率，即ＧＰＥＲ蛋白表达在跟ＧＰＥＲ蛋白表达阳性率相关，在高分化的内膜癌组织中ＧＰＥＲ的阳性表达率宫内膜癌增殖症和子宫内膜癌中的表达。而且，癌组织的分化程度与ＦＩＧＯ分期和预后联系；结果表明，ＧＰＥＲ在子宫内膜增生期的阳性表达率均显著低于在子内膜增殖症及子宫内膜癌组织中ＧＰＥＲ的表达，和ＧＰＥＲ表达与临床病理分期低分化和预后不良等。瑞郭霞等１４７１采用免疫组化法研究子宫内膜增生期，子宫明显降低。由此推断，ＧＰＥＲ过量表达组的癌组织分化较差，常伴有深肌层浸润，体表达出现下调的现象，并且ＧＰＥＲ过量表达组的生存率较适度表达组生存率和雌激素（ＥＲ）表达无显著相关；另外还发现在ＧＰＥＲ过量表达组雌孕激素受表达和表皮生长因子（ＥＧＦ）表达呈正相关，和孕激素受体（ＰＲ）表达负相关，能力。Ｓｍｉｔｈ等［４６Ｊ对子宫内膜癌组织采用免疫组化法进行研究，结果表明，ＧＰＥＲ基他莫昔芬（ＯＨＴ）促原癌基因ｃ—ｆｏｓ表达的效应消失，即失去诱导细胞增殖的Ｑ表达；在转染ＧＰＥＲ反义寡聚核苷酸质粒后，羟挥生物学作用，不依赖于ＥＲ癌基因ｃ－ｆｏｓ表达，该效应主要是经过ＧＰＥＲ活化ＡＫＴ，ＥＲＫＩ信号转导通路发宫内膜癌细胞株Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ中，羟基他莫昔芬（ＯＨＴ）能直接提高原组织中起到一定的作用ｍ书１。Ｖｉｖａｃｑｕａ［１９１在进行体外培养细胞研究证明，在子代谢产物４－羟基他莫昔芬（ＯＨＴ）是ＥＲａ激动剂，在ＥＲａ作为一个独立因子的三氧苯胺（ＴＡＭ）治疗乳腺癌能够增加子宫内膜癌的发病率。三氧苯胺的活性

屠吃·．３７需要对ＧＰＥＲ进行进一步的深入研究，对其生理与病理功能理论不断完善，的研究结果，我们可以推测，ＧＰＥＲ有可能成为治疗肿瘤的新靶点，因此，我们理作用机制的研究较少，且具体机制尚不明确，依据目前对ＧＰＥＲ在肿瘤方面素结合介导的非转录效应在肿瘤发生机制方面的研究较多，对ＧＰＥＲ介导的生速生物学效应，在机体组织中发挥着重要的生物学效应，目前对ＧＰＥＲ与雌激Ｇ蛋白受体，能够与雌激素及Ｇ－１特异性结合，通过多种途径介导雌激素的快总结既往国内外对ＧＰＥＲ的研究可知：ＧＰＥＲ是介导“非转录效应＂的新型供新的方向。号传导途径，能发现一些子宫内膜癌的发病规律，为有效的防治子宫内膜癌提所述，在子宫内膜癌产生及发展的过程中，ＧＰＥＲ有着很重要的作用，阻断其信与Ｅ２结合引起的促细胞增殖作用，促使其发生凋亡，阻滞细胞周期进展。综上用不显著，各浓度间差异无统计学意义。本实验研究表明，ＰＴＸ可抑制ＧＰＥＲ对细胞周期ｓ期作用的差异具有浓度依赖性，使Ｓ期比例下降，对Ｇ２￣Ｍ期作对Ｇ２￣Ｍ期作用具有浓度依赖性，使Ｇ２￣Ｍ期比例下降：在ＨＥＣ．１Ａ细胞，ＰＴＸ在Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞ＰＴＸ对细胞周期Ｓ期作用不显著，各浓度间差异无统计学意义，果显示，ＰＴＸ使子宫内膜癌细胞周期Ｇ旷Ｇｌ期比例增加，并且具有浓度依赖性。ＰＴＸ可抑制Ｅ２促细胞增殖作用，同时可使细胞凋亡数量增加；细胞周期分析结的特性都不明显；（２）在子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ和ＨＥＣ．１Ａ细胞，ＧＰＥＲ抑制剂只是通过非转录效应机制加速细胞增殖，因此，其对Ｅｚ浓度及作用时间依赖性转录作用），促进细胞增殖，加速细胞周期进程，但是，在ＨＥＣ一１Ａ细胞中，Ｅ２综述

ｇｅｌｅｃｔｉｖｅｏｆａ１．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＨＺ，ｅｔＤＡ，ＲｉｎｇＣ，ＴｈｏｍｐｓｏｎＣａｒｒｎｅｃｉ［１】ｏｒｐｈａｎｄｏｓｅＭＤ．ＷｈａｔＪＭ，Ｊｏｈｎｓｏｎ［２】Ｒａｅｃａｎｃｅｒ叨．Ｇｅｎｏｍｉｅｓ，１９９７，４５（３）：６０７—６１７ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙＧ··ｐｒｏｔｅｉｎ－·ｃｏｕｐｌｅｄｈｏｍｏｌｏｇｙｒａＳｅａｒｃｈｉｎｇＬＭ．ＧＰＲ３０／ＧＰＥＲｌ：Ｂ，Ｌｅｅｂ－Ｌｕｎｄｂｅｒｇ【４】Ｏｌｄｅ１６２５－１６３０ｓｉｇｎａｌｉｎｇ明．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，３０７（５７１５）：ｃｅｌｌｒａｐｉｄｍｅｄｉａｔｅｓｉｎｔｒａｃｅｉｌｕｌａｒｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅａ１．ＡＬＡ，ｅｔＤＦ，ＳｋｌａｒＣＭ，Ｃｉｍｉｎｏ【３】ＲｅｖａｎｋａｒＲｅｓ，２００５，７（６）：２４３—２４４ｅｓｔｒｏｇｅｎ？明．Ｂｒｅａｓｔｄｏｈａｖｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓ［６１Ｍｅｔａｂ，２００９，２０（８）：４０９－４Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ【Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｔｒａｎｓｍｅｎｂｒａｎｅｔｈｅｔｈｒｏｕｇｈｓｉｇｎａｌｉｎｇａ１．ＥｓｔｒｏｇｅｎＨＯ，ｅｔＪＢ，ＳｍｉｔｈＥＲ，Ａｒｔｅｒｂｕｒｎｎｏｖｅｌａ１．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＹ，ｅｔＪ，ＰａｎｇＥ，Ｑｕｉｎｎ【８】８科进展，２００９，１８：３７０．３７４【７】庄研，张树泉，贺银燕等．雌激素膜受体ＧＰＲ３０在子宫内膜癌的表达及意义．现代妇产Ｂ信号传导通路的活化．现代妇产科进展，２００５，１４：２７０．２７３郭瑞霞，魏丽惠，王建六．１７１３－雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇３激酶，蛋白激酶［６】１６５－１９０Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００８，７０：ＲｅｖＧＰＲ３０阴．Ａｎｎｕｍｅｍｂｒａｎｅｏｆａｎａ１．ＩｄｅｎｔｉｔｙＥＪ，ｅｔＰ，ＰａｎｇＹ，Ｆｉｌａｒｄｏ【９】Ｔｈｏｍａｓ３２３６．３２４５ｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅ【Ｊ】．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００７，１４８（７）：３０（ＧＰＲ３０）ａｔｃｏｕｐｌｅｄｈＳＣＧＰＲ３０［Ｊ】．Ａｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓａ１．ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＡＳ，ｅｔＨＤ，ＦｉｅｌｄＣＭ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ［１１］Ｒｅｖａｎｋａｒ６３５９－６３６６Ｒｅｓ，２００６，１２（２１）：Ｃａｎｃｅｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ【Ｊ】．Ｃｌｉｎｏｒｏｆｔｕｍｉｎａｎｔｓｄｅｔｅｒｍｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｗｉｔｈａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｉｔｓｐｒｉｍａｒｙｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｉｎｓｐａｎｎｉｎｇｍｅｍｂｒａｎｅ—ｓｅｖｅｎｏｆＧＰＲ３０，ａａ１．ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎＪＡ，ｅｔＣＴ，ＱｕｉｎｎＥＪ，ＧｒａｅｂｅｒＦｉｌａｒｄｏ［１０１ｃｅｌｌｓ【Ｊ】．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００５，１４６（２）：６２４－６３２ｃａｎｃｅｒｂｒｅａｓｔｈｕｍａｎｐＧｏｆｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａ１．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＨ，ｅｔＨ，ＭｏｒｉＫ，ＳａｋａｍｏｔｏＭａｔｓｕｄａ［１３１４８４６－４８５６ｅｓｔｒａｄｉｏｌ【Ｊ１．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００８，１４９（１０）：ａｃｔｉｖａｔｅｄｎｏｔｉｓｒｅｔｉｃｕｌｕｍｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｔｈｅｔｏｌｏｃａｌｉｚｅｓｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄａｌ。ＧＧ，ｅｔＢ，ＳｅｈｗａｒｚＣ，Ｒｏｈｄｅ·Ｓｃｈｕｌｚ２】Ｏｔｔｏ【１２００７，２（８）：５３６—５４４Ｂｉｏｌ，ｓａｏｎｃｏｎｖｅｒｇｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄａ．１ＶｉｒｔｕａｌＳＭ，ｅｔＣＭ，ＹｏｕｎｇＣＣ，Ｒｅｖａｎｋａｒ【１５】Ｂｏｌｏｇａ肿瘤，２０１ｌ，１１（３１）：９７７－９８１【１４】叶佳，张沐等．Ｇ蛋白偶联受体３０在子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞中的表达及亚细胞定位．９４—９９４４１（１）：ｆｏｒｍａｔｉｏｎ【Ｊ】．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｌｅｔｔ，２００８，ｈｉｐｐｏｅａｍｐａｌｒａｔｉｎ３０ｒｅｃｅｐｔｏｒ３８２００２，１６：１１６２．１１６７．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ【Ｊ】．ＭｏｌｐａｔｈｗａｙＳｈｃａｎｄａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎＥＲａｌｐｈａ－ＳｈｃｂｙａｃｔｉｖａｔｉｏｎＭＡＰＫｔｏａｃｔｉｏｎｅｓｔｒｏｇｅｎｏｆｒａｐｉｄａ１．ＬｉｎｋａｇｅＬ，ｅｔＲＡ，ＡｄａｍＲＸ，Ｍｃｐｈｅｒｓｏｍ【１７】Ｓｏｎｇ（８）：６２８－６３０【１６】冀立娟，张雷，王蔼明．Ｇ蛋白偶联受体３０与妇科肿瘤明．中国实用妇产科杂志，２００９，２５Ｂｉｏｌ，２００６，２（４）：２０７—２１２ＣｈｅｍＧＰＲ３０【Ｊ】．Ｎａｔｆｏｒａｇｏｎｉｓｔｏｌｅｒｏｔｅｉｎｅｍｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄｒｏｔｅｉｎ－ｅｎｅ（ＧＰＲ３０）ｗｉｔｈ５】Ｐｒｏｓｓｎｉｔｚ

ｈｕｍａｎｔｈｙｒｏｉｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅ４－ｈｙｄｒｏｘｙｔａｍｏｘｉｆｅｎ７ｂｅｔａ－Ｅｓｔａｄｉｏｌ，ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，ａｎｄａ１．１Ｄ，Ａｌｂａｎｉｔｏ８】Ｖｉｖａｃｑｕａ【１ａ１．ＴｈｅＡＧ，ｅｔＤ，ＲｅｃｈｉａＡ，Ｂｏｎｏｆｉｇｌｉｏ［１９】ＶｉｖａｃｑｕａＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００６，７０（４）：１４１４－１４２３ＧＰＲ３０【Ｊ】．Ｍｏｌｃｏｕｐｌｅｄ－ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｄｕｃｅｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉａｔｅｓｒｅｓｐｏｎｓｅｇｒｏｗｔｈｃｈａｎｇｅｓｇｅｎｅ３０（ＧＰＲ３０）ｍｅｄｉａｔｅｓｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄａ１．ＧＲ，ｅｔＡ，ＬａｐｐａｎｏＬ，Ｍａｄｅｏ［２０】Ａｌｂａｎｉｔｏ１－６４６Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００６，２０（３）：６３ｃｅｌｌｓ【Ｊ】．ＭｏｌｃａｎｃｅｒｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｈｙｄｒｏｘｙｔａｍｏｘｉｆｅｎｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｓＥｒｋ－２Ｅｒｋ－ｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａ１．Ｅｓｔｒｏｇｅｎ．ｉｎｄｕｃｅｄＫＩ，ｅｔＪＡ，Ｂｌａｎｄ【２３１．Ｆｉｌａｒｄｏ【Ｊ】．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，２００８，７３（９／１０）：８７０－８７３ｅｐｉｄｅｒｍａｌｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎｍｅｔａｓｔａｓｉｓｔｕｍｏｒｂｒｅａｓｔｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＲ３０，ｍｅｍｂｒａｎｅＥ．ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎＪＡ，ＳａｂｏＥＪ，Ｑｕｉｎｎ【２２】Ｆｉｌａｒｄｏ１４（３）：４６５－４７１Ｏｎｃｏｌ，２００９，１ｃａｎｃｅｒ【Ｊ】．Ｇｙｎｅｃｏｌｆｏｒｓｕｒｖｉｖａｌｐｏｏｒｐｒｅｄｉｃｔｓａ１．ＧＰＲ３０ＤＹ，ｅｔＨ，ＫｕｏＨＯ，Ａｒｉａｓ－Ｐｕｌｉｄｏ【２１】ＳｍｉｔｈＲｅｓ，２００７，６７（４）：１８５９－１８６６ｃｅｌｌｓ【Ｊ】．ＣａｎｃｅｒｏｖａｒｉａｎＧ－１ｌｉｇａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｄｕｃｅｓｆａｃｔｏｒａ１．ＥｐｉｄｅｒｍａｌＤ，ＡｑｕｉｌａＬ，Ｓｉｓｃｉ［２４】Ａｌｂａｎｉｔｏ２０００，１４（１０）：１６４９－１６６０Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，ＨＢ－ＥＧＦ叨．Ｍｏｌｔｈｒｏｕｇｈｆａｃｔｏｒｇｒｏｗｔｈｅｐｉｄｅｒｍａｌｔｈｅｔｒａｉｌｓ．ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｖｉａｏｃｃｕｒｓｈｏｍｏｌｏｇ，ＧＰＲ３０，ａｎｄ７ｅｆｆｅｃｔｓａ１．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＵ，ｅｔＭＲ，ＳｃｈｕｒｒＥ，Ｍｅｙｅｒ【２６】ＨａａｓＨ１８０６一Ｈ１８１３Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００９，２９７，Ｃｉｒｅｒａｔｓ叨．Ｐｈｙｓｉｏｌｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｉｓｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＥＲ，ｏｆａＭｕｒｐｈｙ．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＭ．Ｄｅｓｃｈａｍｐｓ，Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ【２５】Ａｎｎｅ３７９９—３８０８２００８，１４９（８）：ｃｅｌｌｓ【Ｊ】．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，ｃａｎｃｅｒｂｒｅａｓｔｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｎｅｇａｔｉｖｅｏｆｔｈｅａ１．ＤｅｌｅｔｉｏｎＳＡ，Ｗ＇ｍｄａｈｌＵＥ，Ｓａｌｅｍ【２７】Ｍａｒｔｅｎｓｓｏｎ１３５８．１３６３ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ【刀．Ｈｙｐｅａｅｎｓｉｏｎ，２００７：４９，ｗｉｔｈｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｖｅｉｎｓａｒｔｅｒｉｅｓｂｅｔａ，ａｎｄａｌｐｈａ，ｅｓｔｒｏｇｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｆｕｎｃｔｉｏｎｏｎｅｎｃｏｄｉｎｇｏｆｃＤＮＡｓａ１．ＣｌｏｎｉｎｇＳ，ｅｔＣ，ＫｏｎｄｏＹ，Ｋａｔｏ［２８］Ｔａｋａｄａ１５０，６８７－６９８ｍｉｃｅ［Ｊ】．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００８，ｒｅｌｅａｓｅｉｎｓｕｌｉｎｅｓｔｒｏｄｉｏｌ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｅｌｉｍｉｎａｔｅｓｐｒｅｓｓｕｒｅ，ａｎｄｂｌｏｏｄｉｎｃｒｅａｓｅｓｇｒｏｗｔｈ，ｂｏｎｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ，ｒｅｄｕｃｅｓｇｌｕｃｏｓｅｉｍｐａｉｒｓＧＰＲ３０ｅｌａ１．Ｇ—ｐｒｏｔｅｉｎＭ，ｅｔＪ，ＲａｍａｎｊａｎｅｙａＶＨ，Ｃｈｅｎ【２９］ＰａｔｅｌＲｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９７：２４０，７３７—７４１Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｓｔｒｅｓｓ叨．ｓｈｅａｒｆｌｕｉｄｔｏｅｘｐｏｓｅｄｃｅｌｌｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｈｕｍａｎｅｘｐｒｅｓｓｅｄｐＧｂｙｒｅｌａｘａｔｉｏｎＣＧ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＡＡ，ＳｏｂｅｙＢＲ，Ｍｉｌｌｅｒ［３０】Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ２０１０，２６（２）：１９３—９Ｍｅｄ，ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ１．Ｍｏｌｉｓｃｈａｅｍｉｃｄｕｒｉｎｇｒｏｌｅｈｅａｒｔ：Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｎｄ０１Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０Ｃｉｒｅａｒｔｅｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｃａｒｏｔｉｄｒａｔａｇｏｎｉｓｔｓ３０ｒｅｃｅｐｔｏｒｃｏｕｐｌｅｄｎａｏｆＥ．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＡＭ，Ｍｕｒｐｈｙｌ】Ｄｅｓｃｈａｍｐｓ［３２９８（３）：Ｈ１０５５—１０６１ｉｎｈｉｂｉｔｓＧＰＥＲｒｅｃｅｐｔｏｒｎｏｖｅｌａ１．ＡＬ，ｅｔＭ，ＴｏｒｏＪＣ，Ｅｇｈｂａｌｉ［３２】ＢｏｐａｓｓａＨ１８０６．１８１３Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００９，２９７（５）：ＣｉｒｃＨｅａｒｔｒａｔｓ【Ｊ】．Ｐｈｙｓｉｏｌｆｅｍａｌｅａｎｄｍａｌｅｉｎｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＥＲ，ｉｓｅｓｔｒｏｇｅｎｒｏｔｅｉｎｂｅｔａ－ｅｓｔｒａｄｉｏｌｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒｏｔｅｉｎ－，ｏｖｅｌ