2024年11月13日发(作者：)
发酵牛肉测定大肠菌群实验
一、实验目的
1.了解粪大肠菌群对评价水质的重要性。
2.了解多管发酵法测定粪大肠菌群的原理。
3.掌握多管发酵法测定粪大肠菌群的步骤。
二、实验原理
粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便。在
44.5℃温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大
肠菌群。城市污水既包括人们的生活排出的洗浴、粪尿，也包
括公共设施排出的废水，如医院废水、工业废水等。这些污、
废水都有可能带来大量的病毒和致病菌。由于病菌类别多样，
对每一种病菌进行分析又十分复杂，因此在通常采用最有代表
性的粪大肠菌群指标反映净化水的卫生质量。
粪大肠菌的测定可以用多管发酵法和滤膜法实现。本实验采用
多管发酵法，标准分析方法采用《水质 粪大肠菌群数的测
定》（HJT 347-2007）。
多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN
来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中
的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑，
并且进行大量重复的检定，可以发现这种估计有大于实际数字
的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便
会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显阳性
又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重
复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
三、培养基及试剂
1．培养基
(1)单倍乳糖蛋白胨培养液：（见表6-6-1）
表6－6-1 单倍乳糖蛋白胨培养液成分一览表
名称
蛋白胨
数量
10g
名称
乳糖
氯化钠
数量
5g
5g
名称
数量
1.6%溴甲
酚紫乙醇1mL
溶液
蒸馏水
1000 mL
牛肉浸膏
3g
制法：按照上表要求，将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加
热溶解于1000mL蒸馏水中，调节PH为7.2~7.4，再加入1.6%
溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃
管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮
存于暗处备用。
(2)三倍乳糖蛋白胨培养液:按上述配方比例(蒸馏水除外)配
制三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液，配制方法同上。
(3) EC培养液：（见表6-6-2）
表6-6-2 EC培养液成分一览表
名称
胰胨
胆盐三号
磷酸氢二钾
蒸馏水
数量
20g
1.5g
4g
1000 mL
名称
乳糖
氯化钠
磷酸二氢钾
数量
5g
5g
1.5g
制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有倒置的小玻璃管
的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min。灭菌
后pH应为6.9。
(4) 培养基的存放
密封瓶中的成品脱水培养基应贮存在空气湿度低、温度低于
30℃的避光处。存放时应避免阳光直射，避免杂菌侵入和液体
蒸发。当培养液颜色发生变化或体积发生明显变化时，将被丢
弃。
2．试剂
除非另有说明，本实验所用试剂均为符合国家标准的分析纯
化学试剂。实验用水是新配制的去离子水。
四、实验步骤
1. 水样接种量
水样充分混合后，根据水污染程度确定水样的接种量。每个
样品接种至少三种不同的水样品。应该有五管相同的接种水
样。
相对未受污染的水样接种量为10 mL、1 mL、0.1 mL。受污染
水样接种量根据污染程度接种1 mL、0.1 mL、0.01 mL或0.1
mL、0.01 mL 、0.001 mL等。使用水样量可以参考表6－6-
3。
表6-6-3 接种用水量参考表
接种量（mL）
水样种类
检测方法
-2-3-4-5
100
50
10
1
0.1
10
10
10
10
井水
多管发酵法
×
×
×
河水、塘水
多管发酵法
×
×
×
湖水、塘水
多管发酵法
城市原污水
多管发酵法
×
×
×
×
×
×
如接种体积为10 mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培
养液5 mL；如接种量为1 mL或少于1 mL，则可接种于普通浓
度的乳糖蛋白胨培养液10 mL中。
2. 初发酵试验
将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在
37±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳
性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为
阳性。
3. 复发酵试验
轻微震荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用3mm接种环或灭菌
棒将培养物转接到EC培养液中，在44.5±0.5℃下培养
24h±2h（水浴箱的水面应高于试管中培养基液面）。接种后
所有发酵管必须在30min内放入水浴中。培养后立即观察，发
酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。
五、结果与讨论
根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表6－6-
4或表6－6-5中查得每升水样中的粪大肠菌群。接种水样为
100mL2 份、10mL10 份、总量300mL 时，查表6－6-4可得每
升水样中的粪大肠菌群；接种5份10mL 水样、5 份1mL 水
样、5 份0.1mL 水样时，查表6－6-5求得MPN 指数，MPN 值
再乘10，即为1L水样中的粪大肠菌群。
如果接种的水样不是10mL、1mL 和0.1mL，而是较低的或较高
的三个浓度的水样量，也可查表6－6-5求得MPN 值，再经下
式计算成每100mL 的MPN 值。
表6-6-4 粪大肠菌群检数表
（接种水样100mL2 份、10mL10 份、总量300m）
100mL 水量的阳性瓶数
10mL水量的阳性0
1
管数
1L水样中粪大肠1L水样中粪大肠
菌群数
菌群数
0
<3
4
1
3
8
2
7
13
3
11
18
4
14
24
5
18
30
6
22
36
7
27
43
8
31
51
9
36
60
10
40
69
表6-6-5 最可能数（MPN）表
（接种5 份10mL 水样、5 份1mL 水样、5 份0.1mL 水样
时，不同阳性及阴性情况下100mL 水样中细菌数的最可能数
和95％可信限值）
95%置信
出现阳性份数
出现阳性份数
每100mL水
区间
每100mL水
样中细菌数样中细菌数
10mL1mL
0.1mL
10mL
1mL
0.1mL
上
的最可能数
下限
的最可能数
限
管
管
管
管
管
管
0
0
0
0
0
1
<2
2
<0.5
7
2
1L水样中粪大肠
菌群数
11
18
27
38
52
70
92
120
161
230
>230
95%置信
区间
下
上限
限
9
9
78
80
4
4
2
1
3
0
26
27
0
1
0
2
<0.5
7
4
3
1
0
2
0
4
<0.5
11
4
4
0
1
0
0
2
<0.5
7
5
0
0
1
0
1
4
<0.5
11
5
0
1
1
1
0
4
<0.5
11
5
0
2
1
1
1
6
<0.5
15
5
1
0
1
2
0
6
<0.5
15
5
1
1
2
0
0
5
<0.5
13
5
1
2
2
0
1
7
1
17
5
2
0
2
1
0
7
1
17
5
2
1
2
1
1
9
2
21
5
2
2
2
2
0
9
2
21
5
3
0
2
3
0
12
3
28
5
3
1
3
0
0
8
1
19
5
3
2
3
0
1
11
2
25
5
3
3
3
1
0
11
2
25
5
4
0
3
1
1
14
4
34
5
4
1
3
2
0
14
4
34
5
4
2
3
2
1
17
5
46
5
4
3
3
3
0
17
5
46
5
4
4
4
0
0
13
3
31
5
5
0
4
0
1
17
5
46
5
5
1
4
1
0
17
5
46
5
5
2
4
1
1
21
7
63
5
5
3
4
1
2
26
9
78
5
5
4
4
2
0
22
7
67
5
5
5
六、思考题
1．粪大肠菌群与总大肠菌群的联系与区别?
2. 配制好的培养基存放时应注意哪些问题?
33
34
23
34
43
33
46
63
49
70
94
79
110
140
180
130
170
220
280
350
240
350
540
920
1600
≥2400
11
93
12
93
7
70
11
89
15
110
11
93
16
120
21
150
17
130
23
170
28
220
25
190
31
250
37
310
44
500
35
300
43
190
57
700
90
850
120
1000
68
750
120
1000
180
1400
300
3200
640
5800
3. 如何进行阳性判断?
本文发布于:2024-11-13 08:49:38，感谢您对本站的认可！
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